酸枣仁主要活性成分包括皂苷、三萜类化合物、黄酮类化合物等。吴玉兰等发现黄酮类成分具有镇静催眠作用，其中斯皮诺素确定是酸枣仁汤镇静催眠的药效物质基础之一，因此，以酸枣仁中的斯皮诺素含量为此响应面的优化指标。通过紫外检测其吸光度对提取工艺单因素进行优化，为工业化大生产提供一定的借鉴。
检测方法
1、色谱条件：Agilent XDB-C18色谱柱(4.6mmx250mm,5um);流动相:乙腈-水,采用梯度洗脱(梯度条件见表1);柱温:25℃;检测波长:335nm;流量:1mL・min-1;进样量:5uL。
2、对照品溶液的配制：称取斯皮诺素对照品适量,置于25mL量瓶中,以色谱甲醇配制成质量浓度为0.4mg・mL-1的对照品溶液,精密移取2mL对照品溶液置于10mL容量瓶中,加色谱甲醇制成每1mL含0.08mg的对照品溶液,即得。
3、供试品溶液的制备：取酸枣仁粗粉(过四号筛)8.0g,精密称定,置索氏提取器中,加入石油醚(60~90℃)适量,加热回流6h,弃去石油液,挥去溶剂,药渣转移至超声提取机提取杯中,加80%乙醇160mL,设定提取温度30℃,功率850W,插入φ10变幅杆超声提取40min,过滤,残渣用80%乙醇80mL洗涤2次,合并洗液与滤液,回收溶剂至干,残渣加甲醇溶解,转移至25ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
4、检测波长的确定：分别取对照品与供试品溶液放在200~400 nm波长范围进行扫描,结果两种溶液的紫外光谱中,最大吸收均在335nm处，故确定高效液相检测波长为335nm。
5、标准曲线的绘制：分别取2,5,10,15和20uL体积的斯皮诺素(0.08mg・mL-1)对照品溶液进样检测,以斯皮诺素对照品溶液的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,建立回归方程Y=11.623X-0.0092,r=0.9999,斯皮诺素在0.16~1.6ug范围内,线性关系良好[1]。
提取研究
乙醇溶出率高,经济,无污染,因此姜文倩等人以乙醇水溶液为提取溶剂,采用超声提取法提取酸枣仁中的斯皮诺素,通过实验确定了斯皮诺素的提取条件为:液料比20:1,超声功率820W,乙醇体积分数80%,进行3次平行验证实验,得出斯皮诺素平均含量为1.1973mg・g-1,为工业化提取酸枣仁中的斯皮诺素提供了一定的实验依据[1]。
活性研究
王朔等人评价斯皮诺素(spinosin,SP)对β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-Lg)糖基化的抑制作用,并通过荧光光谱、紫外-可见吸收光谱、傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)、硫磺素T(thioflavin T,ThT)染色、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)等对其抑制机制进行探讨。荧光光谱表明SP能有效缓解晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)的形成,稳定糖基化β-Lg的构象结构,改变Trp和Tyr残基附近的微环境.紫外-可见吸收光谱显示糖基化改变了β-Lg的结构,SP能通过减缓美拉德反应末期的进程抑制AGEs的产生。FTIR分析表明,氢键参与了SP-β-Lg配合物的形成。ThT染色结果显示,SP通过减控蛋白质的错误折叠减少β淀粉样沉积，SDS-PAGE分析显示SP诱导的糖基化β-Lg交联受到抑制。以上结果表明,SP是一种很有前途的抗糖基化剂,可用于食品系统中,减控有害糖基化产物的形成[2]。
张巧月等人研究斯皮诺素对人肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶7种亚型(CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2D6、CYP1A1、CYP2C19和CYP3A4)的体外抑制作用。方法:以200.00、100.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39μmol/L的斯皮诺素与人肝微粒体共同孵育,分别以他克宁、安非他酮、盐酸阿莫地喹、双氯芬酸钠、美芬妥英、氢溴酸右美沙芬和咪达唑仑作为上述7种亚型CYP450酶的特异性探针药物。采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法测定7种探针药物的代谢产物生成量,计算斯皮诺素对人肝微粒体中7种亚型CYP450酶的半数抑制浓度(IC50)。结果:斯皮诺素对人肝微粒体7种亚型CYP450酶的IC50分别为1714、1158、226.1、2288、80.59、101.1、1119μmol/L,均大于50μmol/L。结论:斯皮诺素对人肝微粒体CYP450酶的上述7种亚型均无抑制作用,引发药物代谢性相互作用的可能性较小[3]。
参考文献
[1] 姜文倩,郑陈静,吕曼,等. 酸枣仁中斯皮诺素超声提取工艺优化研究[J]. 现代中医药,2024,44(3):106-110. DOI:10.13424/j.cnki.mtcm.2024.03.020.
[2] 王朔,张彦青,解军波. 斯皮诺素对β-乳球蛋白糖基化的缓解作用及机制[J]. 食品科学,2025,46(11):29-39. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20241205-036.
[3] 张巧月,刘艳艳,万昶宸,等. 斯皮诺素对人肝微粒体细胞色素P450酶的体外抑制作用[J]. 中国药房,2017,28(19):2645-2647. DOI:10.6039/j.issn.1001-0408.2017.19.15.