25-羟基维生素D2是维生素D2的代谢产物，作为评估人体维生素D营养状态的指标，其半衰期较25(OH)D3更短，与维生素D结合蛋白结合能力较弱，临床检测时需考虑不同检测方法的灵敏度差异。2025年12月国家临检中心认证后，相关实验室将聚焦肿瘤早筛、代谢性疾病等领域，通过标准化检测流程提升25-羟基维生素D2检测的临床适用性。
图1 25-羟基维生素D2的化学结构式
背景介绍
维生素D缺乏症主要表现为骨骼疾病，在儿童称为佝偻病，成人依缺乏程度的不同可引起骨质疏松症或骨质软化症。维生素D缺乏是继发性甲状旁腺功能亢进症的常见病因。提高PTH含量，特别是提高缺乏维生素D的老年人的甲状旁腺激素含量，会导致骨软化症、骨转化增高、骨量降低，并有骨折的危险。25-羟基维生素D2含量低还与骨密度低有关。与其他临床资料结合，25-羟基维生素D2的检测结果有助于判定骨代谢。
生理作用
25-羟基维生素D2的生理作用包括：在钙磷代谢调节方面，25-羟基维生素D2通过促进肠道钙磷吸收、减少肾脏排泄，维持血液中钙磷浓度稳定，为骨骼矿化提供原料；在骨骼健康方面，充足的25-羟基维生素D2可预防儿童佝偻病、成人骨软化症及骨质疏松症，降低骨折风险；在免疫调节方面，维生素D受体广泛分布于免疫细胞，25-羟基维生素D2可调节免疫应答，降低自身免疫性疾病（如多发性硬化症、类风湿关节炎）风险；在其他功能方面，研究显示，25-羟基维生素D2水平与心血管健康、糖尿病、癌症等慢性病风险相关，但具体机制仍需进一步验证。[1]
正常范围标准
25-羟基维生素D2的正常范围：多数实验室将成人血清25-羟基维生素D2的正常下限设定为30 ng/mL（75 nmol/L），低于此值可能提示25-羟基维生素D2不足或缺乏；理想水平建议将25-羟基维生素D2维持在40-60 ng/mL（100-150 nmol/L），以支持骨骼健康和免疫功能。注意：部分机构可能采用20 ng/mL（50 nmol/L）作为25-羟基维生素D2的临界值，需以报告单标注的参考范围为准。
检测方法
25-羟基维生素D2的检测方法中，液相色谱串联质谱法可将血清（血浆）中的25(OH)D2和25(OH)D3经甲醇/乙腈沉淀蛋白，采用正己烷萃取，氮气吹干，用初始流动相复溶，使用液相色谱法分离，串联质谱多反应监测模式（MRM）检测，同位素内标法定量，该方法可以分别测定25-羟基维生素D2和25(OH)D3。该方法具有高灵敏度、高特异性和高精准度等特点，但仪器操作复杂，对检验人员的专业度要求高，仪器昂贵，通量低，一般普通的医院检验科无法达到要求。化学发光免疫法依据化学检测体系中25(OH)D浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，进而确定25(OH)D含量的分析方法。由于其操作简单、快速、无同位素污染且容易实现自动化等优点，具有高灵敏度、干扰因素少、准确度高、能自动化批量操作、可控性强，适用于大规模的25-羟基维生素D营养状况的监测，但化学发光法需要配备特定的自动免疫分析仪，且只能测出25-羟基维生素D总的浓度。酶联免疫法中，样本中25(OH)D与其抗体结合，通过洗液除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中25(OH)D的量相关。通过加入与酶反应的底物显色后，于特定波长下检测吸光度，根据颜色的深浅可以分析样品中25(OH)D总量。ELISA法容易实现自动化操作，在节省人力、减少污染方面具有一定的优势，适合于在常规临床实验室开展。但是不能区分25-羟基维生素D2和25羟基维生素D3，ELISA法基质敏感性，容易与其他非目标化合物发生交叉反应，降低检测的特异性，且酶促反应的结果受到反应温度、反应时间及加样准确性等因素的影响较大。其他检测方法还包括放射免疫法、高效液相色谱法、胶体金免疫层析法、胶乳增强免疫比浊法、均相酶免疫法等。[2]
参考文献
[1] 祁晓平,黎介寿.1,25-二羟基维生素D3对抗多种肿瘤作用的研究进展[J].癌症进展, 2013, 11(002):126-129.
[2] 朱监宝,官培龙.25羟基维生素D2和25羟基维生素D3高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒:CN201610554486.2[P].