Rab7属Rab蛋白家族，后者是Ras样GTP酶超家族中的一个大分支，其成员以特异的亚细胞器定位参与膜运输调节。Rab蛋白能在GDP结合的非活性形式与GTP结合的活性形式之间转换，从而调控囊泡的形成、转运、锚着与融合。Rab7在早期内体向晚期内体、以及晚期内体向溶酶体的膜泡转运中发挥重要作用，并能将血管紧张素Ⅱ受体、表皮生长因子受体等转运至溶酶体降解，同时通过促进溶酶体运输清除胞内病毒[3]。RAB7抗体是针对RAB7蛋白（Ras相关蛋白Rab7a）的特异性抗体，主要用于检测和研究RAB7蛋白在细胞内的功能。
RAB7抗体在胰腺癌低氧自噬研究中的实验参数
以人胰腺癌Panc-1细胞为模型，将低氧条件设为37 ℃、5% CO₂、94% N₂、1% O₂处理12 h，并以小干扰RNA和过表达质粒改变SIRT1的表达[1]。该研究以兔抗人RAB7抗体等一抗配合辣根过氧化物酶标记二抗，经10%脱脂奶粉封闭2 h、半干法转膜至PVDF膜后显影。免疫荧光以4%多聚甲醛固定、一抗4 ℃孵育过夜、羊抗鼠Cy3二抗室温避光孵育2 h[1]。结果显示过表达SIRT1可升高FOXO1与RAB7蛋白水平，敲减则使其下降[1]。可见在低氧自噬模型中，RAB7抗体适合作为通路下游的读出指标。
RAB7抗体与自噬通量证据的相互印证
自噬通量的判断不能只依赖单一蛋白。该研究同时追踪了双色LC3荧光蛋白，下调SIRT1后自噬溶酶体（红色荧光点）数量明显增加，而自噬小体（黄色荧光点）变化无统计学意义，提示RAB7所在的通路环节影响了自噬小体与溶酶体的结合，使自噬溶酶体在胞内堆积[1]。研究还以免疫共沉淀证实SIRT1与FOXO1相互作用[1]。此时RAB7抗体提供的是通路分子的表达证据，LC3双标提供的是通量证据，两者互为补充，共同支撑机制可能与FOXO1/RAB7信号通路有关的结论。
RAB7抗体在腓骨肌萎缩症研究中的蛋白层面补充价值
RAB7是常染色体显性遗传的CMT2B型致病基因，在3个CMT2B家系中检出RAB7基因Leu129Phe与Val162Met两个错义突变[2]。CMT发病率约1/2500，而全世界仅报道4个CMT2B家系、3种RAB7基因突变[2]。对6个常染色体显性遗传家系先证者和27例散发病例进行RAB7基因突变分析，所有外显子经单链构象多态性分析均未出现异常条带，47例中国CMT患者中未发现RAB7序列变异[2]。这一阴性结果反而提示，核酸层面筛不到突变时，可用RAB7抗体补充蛋白层面的表达与定位检查，评估该基因是否通过非突变机制参与表型。
RAB7抗体在巨噬细胞TLR9负向调控研究中的表达时相
以小鼠巨噬细胞系RAW264.7为模型，以脂质体法转染Rab7真核表达质粒及失活突变质粒，经CpG ODN刺激后检测mRNA，发现Rab7表达在8 h达到高峰，约为初始水平的4倍[3]。研究中用于Western法鉴定G418稳定筛选后细胞株的表达效果[3]。结果显示，Rab7过表达显著降低CpG诱导的IL-6、IL-1β与IFN-β表达，而第22位苏氨酸突变为天冬酰胺的失活突变体Rab7T22N则逆转了这一抑制效应[3]。RAB7抗体在此类研究中承担的是过表达是否成功、失活突变体是否正常表达的把关角色。
RAB7抗体使用前必须完成的靶点辨析
文献中的Rab7并非单一实体。RAB7A与RAB7B是两个不同基因编码的蛋白，前者即通常所称的RAB7，是CMT2B的致病基因。后者定位于晚期内体与溶酶体，负向调控TLR4及TLR9信号，序列与RAB7A不同[3]。此外，Leu129Phe与Val162Met同为RAB7A上的错义突变位点，而文献中的RAB7抗体多在小鼠与人类样本间交叉使用[1,2]。选型RAB7抗体时，应优先确认说明书标注的是RAB7A还是RAB7B，核对免疫原对应的氨基酸区段，并重点关注该区段是否覆盖上述两个突变位点，若表位与突变位点重叠，抗体的识别能力可能受突变影响。
参考文献
[1] 田舍, 江建新, 喻超, 等. SIRT1通过调节FOXO1/RAB7信号通路促进低氧诱导的胰腺癌细胞自噬[J]. 中国病理生理杂志, 2019, 35(9): 1545-1550.
[2] 张如旭, 郭鹏, 任志军, 等. LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症患者的突变分析[J]. 遗传, 2010, 32(8): 817-823.
[3] 王娜, 王玉珍, 万永青, 等. Rab7负向调控巨噬细胞中CpG诱导的细胞因子的表达[J]. 中国免疫学杂志, 2012, 28(8): 681-684.