人低氧上调蛋白1（HYOU1），又名ORP150、GRP170，UniProt编号Q9Y4L1，含999个氨基酸，是定位于内质网腔的HSP70家族分子伴侣，参与缺氧与内质网应激下的蛋白折叠与分泌，其表达上调常见于肿瘤微环境的缺氧与代谢应激。HYOU1抗体是针对缺氧上调蛋白1（HYOU1） 的科研工具，HYOU1也称为ORP150、GRP170或HSP12A，属于热休克蛋白70家族。它在细胞应对缺氧等应激条件时发挥关键的保护作用，并参与内质网中的蛋白质折叠与分泌过程。
在肝细胞癌研究中。先用UALCAN与GDC数据库确认HYOU1在肝癌组织中高表达，ROC曲线下面积为0.822（95%CI 0.775~0.868），生存分析显示高表达者总生存期更短。随后在Huh7细胞与正常肝细胞WRL68之间用RT-qPCR与Western blot验证，Huh7的mRNA与蛋白水平均显著偏高。敲低HYOU1可下调ROCK2并降低p-CREB（Ser133），过表达则产生相反效应。该研究使用的是免疫印迹法，一抗包括HYOU1、ROCK2、CREB、p-CREB与GAPDH，5%脱脂奶粉室温封闭，一抗4℃孵育过夜，辣根过氧化物酶标记二抗室温孵育1小时，ECL显色后用ImageJ定量[1]。该研究中，关于肝癌组织的表达结论来自数据库转录组，并未在组织切片上做HYOU1抗体染色验证。
胰腺癌的研究中，用GEPIA与GEO的GSE12417数据集（274例，高表达195例、低表达79例）显示高表达组生存率明显更低，并以肿瘤与癌旁配对样本做免疫组化染色，显示肿瘤组织HYOU1表达高于癌旁。该研究使用蛋白免疫印迹法：抗HYOU1抗体1:1000，抗actin抗体1:1000，PI3K、p-PI3K、Akt按1:1000、p-Akt按1:2000，PVDF膜、5%脱脂牛奶室温封闭1小时、一抗4℃过夜、TBST清洗3次、二抗室温1小时、ECL显色。但免疫组化的操作描述只写到枸橼酸钠溶液抗原修复、3%过氧化氢处理、正常非免疫动物血清封闭30分钟、滴加一抗4℃过夜、二抗孵育30分钟、DAB显色与苏木精复染[2]。
选择HYOU1抗体时，需要注意以下几点。第一，按实测约150kDa而非预测的111kDa设定判读窗口。第二，确认种属覆盖，尤其是大鼠、小鼠模型。第三，核对免疫原落点与目标形式是否匹配，避免把内质网腔形式与胞质形式混为一谈。第四，组织化学场景下固定修复液与抗体批次，把核着色与胞质着色分开计分。第五，利用切片内现成的对照，如同批癌与癌旁配对样本，以及切片内不表达该蛋白的细胞类型。
参考文献
[1] 阿力木江·阿布力米提, 阿依甫汗·阿汗. HYOU1调控ROCK2表达激活cAMP信号通路介导肝细胞癌转移的机制研究[J]. 中国实验诊断学, 2026, 30(7): 1018-1024.
[2] 丁家璐, 孙倍成. HYOU1在胰腺癌发生发展中的作用及其调控机制[J]. 安徽医科大学学报, 2024, 59(8): 1354-1361.