背景及概述[1]
苦参为豆科槐属植物 Sophora flavescens A it .干燥根。具有清热燥湿、杀虫、利尿等功效。苦参主要含生物碱和黄酮成分。异苦参酮便属于其中的黄酮成分。
含量测定[1]
1 仪器与试剂
1.1 仪器 HP- 1100型高效液相色谱仪，VW D紫外检测器 (美国惠普)， ZB - 2010 色谱工作站 (成都知本科技开发有限公司 )。
1.2 试剂 甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为纯化水；异苦参酮对照品 (含量>99.4 %)；苦参药材样品 [市售，经鉴定为苦参 (Sophora flavescens A it . )干燥根] 。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Hypersil C18 (4.6 mm×200 mm，5μm )，流动相：甲醇-水 (7∶3)，流速：0.7 mL·min-1，检测波长: 287 nm，柱温：35 ℃；进样量：10 μL。
2.2 供试品溶液的制备
精密称取苦参粉末[过筛孔内径(360±15 ) μm ]约 1.0 g，同时另取本品测定水份，置 50 m L具塞锥形瓶中，加甲醇-水 (1∶1)50 mL，称定重量，加热回流 40min，放冷，再称定重量，用甲醇-水 (1∶1 )补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜 (0.45μm )过滤，得供试品溶液，备用。样品含量均以干燥品计算 。
2.3 对照品和样品的色谱图
按上述色谱条件，对异苦参酮对照品和样品进行测定。样品的色谱图中对照品的保留值处有相应的色谱峰，色谱图见图 1。结果表明，异苦参酮出峰时间约为9.62 min , 能与样品中其他成分获得很好的分离，可用于定量分析。
2.4 线性关系考察
精密称取置减压干燥器 (五氧化二磷)中干燥24 h的异苦参酮对照品 11.67 m g于50 m L容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 0.2334 mg mL- 1的对照品溶液，分别精密吸取溶液 2, 4 , 6 , 8, 10μL注入高效液相色谱仪 ,测定峰面积。对所得的异苦参酮峰面积(Y )和对照品进样量(X )作回归处理 , 进样量线性范围为0.466 8～2 .3340μg, 回归方程为: Y =711 . 647 2X +14 . 544 4 (r=0 .999 9)。
2.5 精密度和稳定性试验
对同一浓度的样品溶液和对照品溶液，连续进样 5 次，以异苦参酮的峰面积计算 , RSD 分别为1.04 %和 0.89%。 每 2小时进样 , 样品峰面积基本不变 , 溶液在 24 h内稳定 。
2.6 重复性试验
称取甘肃徽县苦参样品粉末约 1.0 g, 精密称定，共取 5份 , 按 “ 2. 2”项下的方法提取 、测定 。 测得平均含量为 0 .58%, RSD =0.86 % (n =5)。
2.7 加样回收试验
精密称取已知异苦参酮含量的苦参样品约 0.5g，共 5份，加入一定量的异苦参酮对照品，按 “供试品溶液的制备 ”项下方法操作，并进行色谱分析。结果异苦参酮的平均回收率为 95 . 63%, RSD =1 . 2 % (n =5)。
2.8 样品含量测定
取本品粉末 [过筛孔内径 (360 ±15)μm ] 约 1.0 g, 精密称定 , 按 “2. 2”项下进行样品处理，精密吸取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪。 按外标法以峰面积计算，即得。
主要参考资料
[1] 彭远松,易晴仁.高效液相色谱法测定苦参中异苦参酮的含量[J].医药导报,2005(04):335-336.