背景及概述[1]
豨莶草为菊科植物豨莶SiegesbeckiaorientalisL.、腺梗豨莶SiegesbeckiapubescensMakino或毛梗豨莶SiegesbeckiaglabrescensMakino的干燥地上部分。中医理论认为豨莶草性寒，味辛、苦，用于风湿痹痛、筋骨无力等。通过多年研究发现豨莶草中的化学成分豨莶醚酸(siegesbeckicacid)具有显著抗疟作用。
制备[1]
豨莶醚酸的制备：豨莶的干燥地上部分10kg粉碎后，以10倍量90％乙醇回流3次，每次2小时，合并提取液，减压回收溶剂，得乙醇提取物，该提取物上大孔树脂HP-20柱，分别用蒸馏水和30％EtOH洗脱至洗脱液无色，回收80％EtOH洗脱液至干，得80％EtOH洗脱部分。将80％EtOH洗脱部分进行硅胶柱层析，以氯仿-甲醇5∶1进行梯度洗脱，用薄层层析检查层析流分，具有相同单一斑点的流分合并，浓缩，分得流分1、2、3、4、5，将其中的第3和第4部分再分别进行正相硅胶柱层析，以不同比例的氯仿-甲醇进行洗脱，再经反复RP-C18层析(MeOH∶H2O)分离、纯化，得到豨莶醚酸146mg。
应用[1]
豨莶醚酸体外抗疟活性测定：抗疟活性可以通过测量疟原虫LDH活性来确定。在含10μL连续豨释测试样本的96孔板的每个孔中加入感染了D6orW2株P.falciparum的红细胞混悬液(200μL，在RPMI1640培养集中加入10％人血清和60lg/mL阿米卡星，使疟原虫血症达到2％，红细胞压积达到2％)，然后用90％N2，5％O2，and5％CO2组成的混合气体冲洗板，在培育房内培育72小时，温度保持在37℃。LDH活性用MalstatTM试剂测定，测定程序参照Makler和Hinrichs的程序。简要说来，就是将20μL培育的混合物同100μLheMalstatTM试剂混合，在室温下培育30分钟.然后加入20微升NBT/PES的混合物(NBT/PES比例为1∶1)，在黑暗条件下培育1小时。之后，加入100μL5％醋酸溶液终止这一反应，并用650nm来检测板.药物对照组中加入青蒿素和氯喹。从剂量-效应曲线中计算出IC50。测定化合物抗疟活性的选择性指标时，也要测定他们在体外对哺乳动物细胞的毒性.测试在96孔组织培养板中进行。在96孔板中以25，000个/孔的密度种植非洲绿猴肾异倍体细胞并培育24小时.加入不同浓度的样品，即豨莶醚酸化合物溶液，浓度为528.8ng/ml、1586.4ng/ml、4760g/ml，继续培育48小时。利用NeutralRedassay方法测定存活细胞数，从剂量-效应曲线中计算出IC50。用阿霉素作为阳性对照药物。结果显示，豨莶醚酸有较好的体外抗疟原虫活性。
主要参考资料
[1] CN201610158681.3 豨莶酸在制备治疗疟疾药物中的应用