抗体纯化总翻车？Protein A/G PLUS-Agarose到底神奇在哪？

Protein A/G PLUS

在研究低表达蛋白、蛋白 - 蛋白相互作用或蛋白 - 核酸相互作用时，免疫沉淀（IP）、免疫共沉淀（Co-IP）、染色质免疫沉淀等分子纯化方法是重要工具。而 Protein A/G PLUS-Agarose，就是这类研究中常用的关键试剂。

Protein A/G PLUS 是一种经基因工程改造的蛋白，它融合了 Protein A 和 Protein G 的结合特性，因此具备极高的结合容量。其作用机制是与哺乳动物抗体亚型（尤其是 IgG、IgA、IgE 和 IgM）的 Fc 区域共价结合。更重要的是，Protein A/G PLUS 被偶联到高质量的 CL-6B 琼脂糖树脂上，这使得它成为一款优质产品，能从哺乳动物样品中获得高纯度、高产量的 IgG。同时，它在纯化和检测小鼠单克隆抗体（IgG 亚类）时，不会受到其他血清蛋白的干扰，不过需要注意的是，该产品仅用于科研，不用于诊断或治疗。

使用 Protein A/G PLUS-Agarose 常见问题解答

1. 进行 Co-IP 实验时，出现背景较深或有杂带的情况，该如何解决？

若因固相基质的非特异性结合导致，可对琼脂糖微球进行 pre clear（预清除）处理，或直接更换为磁珠。

若因抗体结合了非特异蛋白，可通过设置对照实验来排除非特异性条带。

若因洗涤不当造成杂带，可对洗涤缓冲液进行优化，改善洗涤效果。

2. 实验中靶蛋白没有出现条带，可能是什么原因？该怎么解决？

可能是未添加抑制剂或裂解液选择不合适，导致蛋白构象改变无法结合抗体，或蛋白发生降解。此时需及时添加合适的抑制剂，并更换适配的裂解液。

可能是饵蛋白难以洗脱，可换成强度更高的洗脱缓冲液，提升洗脱效率。

可能是选用的抗体不合适，建议选择经过 IP 实验验证的抗体，并优化抗体的用量。

可能是蛋白间为弱相互作用，或相互作用依赖翻译后修饰，需结合实验情况进一步调整实验条件。

3. Input 条带清晰，但 Co-IP 条带很弱，这该怎么办？

可能是饵蛋白 X 和靶蛋白 Y 的相互作用本身就比较弱，导致富集效果不佳。

可能是饵蛋白 X 并非靶蛋白 Y 的唯一结合蛋白，仅有部分 Y 与 X 发生互作。这种情况下，可尝试反向拉取，比如用 Y 作为饵蛋白去拉取 X，或许能获得更好的实验效果。

4. 目的蛋白与抗体重链分子量接近，如何减少抗体干扰？

在 IP 和 WB 实验中，使用不同种属来源的一抗，并选择与 IP 抗体种属无交叉反应的二抗。

选用特殊二抗，例如仅识别抗体重链或轻链的二抗，或者仅识别天然抗体的二抗。

从源头遏制干扰，将抗体交联到固相基质或 Protein A/G 上，避免洗脱过程中抗体对目的蛋白检测造成干扰。

5. 琼脂糖难以离心，离心时容易被吸上来，有什么解决办法？

可使用带滤膜的离心柱，离心柱下部配备接样管，能将琼脂糖完全截留在滤膜上，避免被吸走。

直接将琼脂糖更换为磁珠，磁珠离心操作更便捷，可避免上述问题。

6. 目的蛋白没有对应的特异性抗体，无法进行免疫沉淀，该如何解决？

若目的蛋白带有标签，可选择针对该标签的抗体来进行免疫沉淀实验，从而实现对目的蛋白的富集。

Protein A/G PLUS-Agarose 凭借其独特的优势，在抗体纯化、IP、Co-IP 等实验中发挥着重要作用。如果你在科研工作中需要这款高效的试剂，可访问优宁维的 Protein A/G PLUS-Agarose 产品页面了解更多详情并进行选购，产品链接：https://www.univ-bio.com/protein-ag-plus-agarose/sc-2003.html

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