TriiZol高效总RNA抽提的优质选择
发布日期:2025/11/13 17:25:59发布人：上海优宁维生物科技股份有限公司
TriiZol
TriiZol基本知识
产品简介
TriiZol是一种用于细胞或组织总RNA抽提的试剂。它采用与Invitrogen公司的TRIzol完全相似的原理和方法，抽提的方法和步骤完全相同。TriiZol的颜色和TRIzol相同，加入氯仿后上层呈无色，下层呈红色，便于吸取上层水相。
适用范围
TriiZol适用于动植物细胞或组织及细菌的总RNA抽提。它能够有效抑制RNA的降解，确保提取的RNA无DNA和蛋白污染。一般所得RNA溶于DEPC水后的A260/280值为1.8-2.0。
提取效果
产量：每百万细胞用TriiZol抽提可得5-15μg RNA；每毫克组织用TriiZol抽提可得1-10μg RNA。产量因细胞和组织不同而异。
质量：提取的RNA可直接用于Northern、点杂交、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆、RT-PCR等实验，也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。
使用方法
细胞裂解
组织样本：
每50-100 mg组织加1 ml TriiZol，样品体积不应超过TriiZol体积的10%。
将动物或植物组织切成小块，在液氮中磨碎或用匀浆器匀浆处理。
将研磨好的组织粉末快速转入装有1 ml TriiZol的2 ml离心管中，在涡旋振荡器上迅速振荡混匀，置于冰上。
对于富含蛋白、脂肪或多糖物质的组织样品，可于4℃ 12,000 x g离心10 min，然后吸取上清至新的离心管中。
细胞样本：
贴壁细胞：吸尽培养液，每10 cm²培养面积（6孔板单孔或35 mm平皿）加入1 ml TriiZol，用加样器吹打数次，确保细胞完全裂解，然后转移至离心管中。
悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每5-10×10⁶动植物或酵母细胞，或每1×10⁷细菌细胞加入1 ml TriiZol，用加样器吹打，使其完全裂解，然后转移至离心管中。
液相分离
裂解产物于室温放置5 min，使核酸-蛋白复合物完全分离。
每1 ml TriiZol加入0.2 ml氯仿，盖紧管盖，剧烈振荡15 s，室温放置2-3 min。
4℃ 12,000 x g离心15 min，样品会分成三层：桔黄色的下层有机相，中间层和无色的上层水相。
吸取含总RNA的上层水相至新的离心管中，吸取水相的体积为所用TriiZol试剂的60%。
RNA回收
按照每1 ml TriiZol的最初使用量加入0.5 ml异丙醇，颠倒数次混匀，室温放置10 min。
4℃ 12,000 x g离心10 min，弃除上清，可见胶状的RNA沉淀。
按照每1 ml TriiZol的最初使用量加入1 ml 75%乙醇，颠倒数次混匀，洗涤沉淀。
4℃ 12,000 x g离心5 min，弃除上清。
室温倒置5-10 min晾干或真空抽干。
加入适量（如25 μl）DEPC-ddH₂O或TE缓冲液，用加样器吹打数次溶解RNA。
通过RNA电泳以及紫外分光光度计检测，确定RNA的浓度、纯度和完整性。
所得的RNA应立即使用或适量分装后-80℃保存，避免反复冻融。
储存/保存方法
温度：4℃避光密闭保存，保质期12个月。
Q1：TriiZol提取的RNA质量如何？
A：TriiZol提取的RNA无DNA和蛋白污染，A260/280值一般为1.8-2.0，RNA完整性好，适用于多种下游应用，包括Northern、点杂交、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆、RT-PCR、基因表达芯片分析和高通量测序等。
Q2：TriiZol的保存条件是什么？
A：4℃避光密闭保存，保质期12个月。
Q3：使用TriiZol时需要注意什么？
A：RNA酶污染：所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可180℃烘烤4小时以去除RNA酶，其他器物可用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌、烘干。溶液需用DEPC水配制。
冻存样品：使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差。如果不能及时抽RNA，建议先加入适量TriiZol，并裂解样品后冻存。
操作防护：必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。
安全防护：TriiZol含有有毒物质苯酚，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触TriiZol，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请听取医生意见。
Q4：如何测量RNA的A260/A280比值？
A：建议使用RNA定量缓冲液对样品稀释后，进行测量。
Q5：TriiZol提取的RNA产量如何？
A：每百万细胞用TriiZol抽提可得5-15μg RNA；每毫克组织用TriiZol抽提可得1-10μg RNA。产量因细胞和组织不同而异。
Q6：TriiZol提取的RNA可以用于哪些下游应用？
A：提取的RNA可直接用于Northern、点杂交、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆、RT-PCR等实验，也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。
总结
爱必信的TriiZol试剂以其高效、可靠和操作简便的特点，成为了实验室中提取高质量RNA的理想选择。它能够有效抑制RNA的降解，确保提取的RNA无DNA和蛋白污染，适用于多种下游应用。
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