一．为什么PVDF膜需要甲醇激活?
1. PVDF膜本身极度疏水
PVDF(聚偏二氟乙烯)是一种疏水性高分子材料，表面含有大量氟原子，形成“防水屏障”水溶液难以润湿。这种特性虽然利于长期保存，但在WB实验中却成为障碍，因为蛋白和缓冲液都是水溶性的。
2. 甲醇激活改变膜表面性质
甲醇分子一端亲水(-OH)一端疏水(CH3)。当PVDF膜浸入甲醇时，甲醇的疏水端与膜表面结合，亲水端朝外，形成“水桥”"，使膜从疏水变为亲水，从而:(1)降低表面张力；(2)改变膜孔构型；(3)增加膜对水溶液和蛋白的亲和力。
3. 增强蛋白结合能力
激活后的PVDF膜表面暴露出更多正电荷基团，有利于结合带负电的蛋白质，提高转膜效率和蛋白结合量。
4. 去除SDS，促进蛋白沉积
在SDS-PAGE中，蛋白表面包裹SDS，带负电。甲醇可以去除部分SDS，减少蛋白间的电荷排斥，使其更容易附着在膜上。
5. 暂时缩小膜孔径，防止小蛋白穿膜
甲醇处理可使膜孔径略微收缩，有助于截留小分子量蛋白，提高转膜完整性。
二．PVDF膜不激活会怎么样?
1. 转膜效率极低，信号弱或无信号。
2. 蛋白分布不均匀，背景高、条带模糊。
3. 小蛋白容易“穿膜而过”。
4. 后续洗脱步骤中蛋白容易脱落。
三．激活操作小贴士
1. 激活时间:一般浸泡甲醇3-30秒即可。
2. 激活后处理:立即转入转膜缓冲液中平衡，防止膜干燥。
3. 注意:激活时间过长可能导致膜收缩过度，影响结合效果。
甲醇激活是PVDF膜成功用于WB的关键步骤，它通过改变膜表面性质、增强蛋白结合、提高转膜效率，确保实验信号清晰、结果可靠。
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