小刀今天踏着七彩祥云,带着siRNA文库来咯~
确实,这不是我次叨叨siRNA文库了,只是我实在不忍心这么好的东西还没有被大家看到!

所以,无论如何我今天都要当一回优宁维“李佳琦”,全方面给大家展示siRNA文库的功能性、实用性及其可操作性!

1. siRNA文库展现形式:

○每块96孔板设有80个基因的siRNA,阵列排布于第2列至第11列
○第1列和第12列为空,可根据实验需要自行设置相应的对照
TIPs: 小文库基因数大概在100左右,所以到手也就一两块96孔板
2. siRNA文库溶解稀释方法:
○用排枪直接将无RNA酶的水添加至96孔板中,稀释至母液浓度
○根据实验需求,等分成多块96孔板子板,避免反复冻融
○用量:以0.1nmol规格,母液稀释浓度2uM,使用终浓度为25nM为例:96孔板筛选(100ul/孔),每次筛选需进行3个重复,共需用到4ul左右。(可支持约10次筛选)
3. siRNA文库筛选操作方法:

○反向转染两步法操作——转染当天配制转染复合物,随后加入细胞悬液
○整个过程只需1把排枪和1块96孔板,简直不要太简单奥!
4. siRNA文库筛选检测方法:
○表型变化检测:细胞活力、细胞迁移、细胞形态、细胞周期分析等
○mRNA水平检测:qPCR, microarray analysis, northern blotting
○蛋白水平检测:western blot, immunofluorescence, FACS analysis
小刀以之前和大家分享过的siRNA去泛素化酶小库为例:
筛选应用
期刊
细胞
siRNA使用终浓度
筛选检测方法
筛选潜在乳腺癌治疗靶点
Genes Dev. 2020
MDA-MB-231
10nM
Western blot
筛选调节蛋白质内稳态相关基因
Nat Commun. 2021
MRC-5
50nM
S9.6 immunostaining signal
筛选与细胞纤毛生成相关基因
Nat Commun. 2018
hTERT-RPE1
10nM
纤毛生成百分比
筛选调节炎性小体活动相关基因
FEBS Lett. 2017
THP-1
40nM
ELISA
当然,除了去泛素化酶小库以外,我们还提供各种类型大库、中库、小库和小小库。小刀把它们全部罗列出来,有需要的老师可以联系身边的优宁维销售,还有对应的基因列表供您参考挑选哦~!
siRNA文库范围
基因数(Human)
基因数(Mouse)
Genome 全基因组
~19000
~20000
Druggable Genome 成药基因组
7553
6457
Drug Targets 药物靶点
4786
5144
Protein Kinases 蛋白激酶
709
742
Ion Channels 离子通道
349
335
DNA Damage Response DNA损伤应答
240
/
Membrane Trafficking 膜运输
140
/
Cell Cycle Regulation 细胞周期调控
131
128
Cytokine Receptors 细胞因子受体
116
/
Tyrosine Kinases 酪氨酸激酶
88
/
Nuclear Receptor 细胞核受体
52
/
Ubiquitin Enzymes 泛素化酶文库包括:
Ubiquitin Conjugation Subset 1 - Cullins, E1, E2, HECT E3 Ligases
87
80
Ubiquitin Conjugation Subset 2 - F-box, SOCS box E3 Ligases
115
103
Ubiquitin Conjugation Subset 3 - RING finger and RING finger-like E3 Ligases
386
329
Deubiquitinating Enzymes 去泛素化酶
98
126
最近siRNA文库大放价,小文库买起来就更划算了喂,确定不来一套试试看吗?

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