名称:AF488NHS活化酯 

品牌: Medlife

纯度:  COA

货号:PC21372

规格:1mg/价格:¥2080.00

规格:5mg/价格:¥4680.00

链接:https://www.med-life.cn/product/1230593.html

一、产品简介

AF488 NHS 活化酯（AF488 NHS ester，即 Alexa Fluor 488 琥珀酰亚胺酯）是磺化罗丹明绿（sulfonated Rhodamine Green）类绿色荧光染料的氨基反应型活性衍生物，也是目前生物标记领域应用最广泛、综合性能最优的绿色荧光标记试剂之一。其分子中的 N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化酯基团可在温和条件下与生物分子上的伯胺（R-NH₂）发生亲核取代反应，形成稳定的酰胺键，从而将 AF488 荧光团共价偶联至抗体、蛋白、多肽、氨基修饰寡核苷酸及其他含氨基分子上。

相比传统荧光素类染料（如 FITC），AF488 通过引入磺酸根离子大幅提升水溶性，荧光强度更高、pH 稳定性更宽（pH 4～10 荧光保持不变）、抗光漂白能力更强，且因带多个负电荷而不易发生分子间聚集与荧光自淬灭。其激发/发射波长（495/519 nm 附近）与 488 nm 激光线高度匹配，是共聚焦显微镜、流式细胞仪与荧光酶标仪的标准绿色通道首选。本产品为 Medlife 提供的高纯度 AF488 NHS 活化酯，货号 PC21372，适用于抗体标记、核酸探针制备、活细胞成像与多色荧光分析等场景。

二、作用机制

AF488 NHS 活化酯的标记原理可从以下五个层面理解：

1. NHS 酯的氨基亲核取代反应 NHS 活化酯（N-羟基琥珀酰亚胺酯）是生物标记中最常用的活化基团。它将羧酸转化为良好的离去基团，使蛋白赖氨酸残基的 ε-氨基或N-末端 α-氨基能够亲核攻击羰基碳，发生取代反应生成稳定的酰胺键，同时释放 N-羟基琥珀酰亚胺。该反应温和、高效、不破坏蛋白质天然构象。

1. pH 依赖的反应选择性 NHS 酯标记通常在 pH 7.2～8.5（常用 0.1～0.2 M 碳酸氢钠缓冲液，pH 8.3）进行。由于末端 α-氨基 pKa 低于赖氨酸 ε-氨基，采用接近中性的 pH 可实现对蛋白 N-末端的选择性标记，为定点标记提供调控空间。pH 过高会加速 NHS 酯水解，pH 过低则氨基质子化、反应受阻。

1. 磺化荧光团的光物理优势 AF488 在罗丹明绿核心上引入两个磺酸根，带来四重提升：水溶性大幅增强、荧光强度提高、pH 稳定性拓宽至 4～10、光稳定性提升，而激发与发射谱图基本不变。多负电荷特性使其在标记同一蛋白多分子时不易聚集、不易自淬灭，标记产物均一性好。

1. 竞争性水解与稳定性权衡 NHS 酯在水溶液中同时发生目标标记反应与竞争性水解反应（生成游离羧酸）。因水解竞争显著，标记须在无水有机溶剂配制母液、短时（室温 1 h 左右）、氨基-free 缓冲体系中完成，以提高偶联效率、减少试剂损失。

1. 偶联物性能与检测灵敏度的提升 与光谱相似的 FITC 相比，AF488 偶联物表现出更亮的荧光与更高的光稳定性，在低浓度下仍可实现高灵敏度检测，背景干扰低，是长时间成像与微弱信号检测的优选标记基团。

三、主要应用领域

1. 抗体与蛋白的荧光标记（免疫荧光/流式核心） AF488 NHS 活化酯最经典的用途是偶联 IgG 抗体等蛋白，制备直接荧光抗体。产物广泛用于免疫荧光染色（IF）、流式细胞术多色分析、Western Blot 荧光检测与 ELISA，用于细胞表面抗原与胞内蛋白的定位与定量。

1. 流式细胞术多色方案 作为 488 nm 激光激发的标准绿色通道染料，与 PE、PerCP、APC 等染料搭配，可构建多色流式 panel，进行免疫表型分析、细胞亚群分选与功能状态评估。

1. 核酸探针与荧光原位杂交（FISH） 通过标记氨基修饰的寡核苷酸，制备荧光 DNA/RNA 探针，用于 FISH 定位特定基因序列、检测染色体异常与病原微生物核酸，实现高灵敏度的核酸成像。

1. 活细胞与组织成像 标记转铁蛋白、EGF、微管蛋白等，实现内吞作用追踪、细胞骨架染色、受体定位与亚细胞结构荧光显微成像；宽 pH 适用性使其可用于酸性细胞器与碱性缓冲体系的成像场景。

1. 超分辨成像与动态追踪 优异的光稳定性使其适配 STED、dSTORM 等超分辨显微技术；亦可用于长时间活细胞动态追踪，如细胞分裂过程中纺锤体形成与解散的连续观察。

1. 分子互作分析与 FRET 探针构建 作为 FRET 供体，与 Cy3 等受体荧光团配对，研究蛋白–蛋白、蛋白–核酸相互作用；亦可用于构建荧光传感器、靶向探针与荧光纳米颗粒，实现分子互作与药物分布的灵敏探测。

四、使用方法与注意事项

使用方法

• 母液配制：将 AF488 NHS 活化酯溶于高质量无水 DMF 或 DMSO 中配成母液（如 10 mg/mL），现配现用。切勿用水或含水缓冲液配制母液，否则 NHS 酯迅速水解失活。

• 蛋白准备：目标蛋白需溶解于不含游离氨基的缓冲液（如 0.1 M 碳酸氢钠，pH 8.3）；蛋白浓度建议 ≥2 mg/mL（2～20 mg/mL 为佳），浓度过低会显著降低标记效率。

• 反应条件：按目标摩尔比（建议设置 3 个不同染料/蛋白比作梯度优化）加入染料母液，室温避光反应约 1 h；标记建议在 pH 7～9 范围内进行。

• 偶联物纯化：采用凝胶过滤柱（Sephadex G-25、BioGel P-30 或等效介质）去除游离染料；大分子或小分子蛋白可选择匹配截留分子量的介质或透析法纯化。

• 纯化后保存：加入适量蛋白稳定剂（如 BSA-free 配方或叠氮钠微量）后 4℃ 避光保存，避免反复冻融。

注意事项

• 严禁使用含伯胺的缓冲液：不可使用 Tris、甘氨酸、铵盐缓冲液，也不可加入 BSA 等蛋白稳定剂（其含游离氨基会竞争消耗染料），否则标记效率将大幅下降。

• NHS 酯对湿气极敏感：务必干燥保存产品；使用前须将产品从 -20℃ 取出，室温回温至少 20 min 后再开盖，以防冷凝水导致试剂水解。

• 分子量口径差异：游离酸型分子量约 631.54，锂盐型为 643.4（部分供应商标注 C₂₅H₁₇N₃O₁₃S₂ 与 C₂₅H₁₅Li₂N₃O₁₃S₂ 两种形式）。配制时以 COA 标注的分子量与含量为准进行摩尔比计算。

• 保存条件与有效期：-20℃ 干燥避光保存，有效期通常约 6 个月；HPLC 等纯度以 COA 为准。

• 个人防护与处置：操作时穿实验服、戴一次性手套与护目镜，在通风良好处进行；该试剂为荧光染料，应避光操作；废液按实验室有机/荧光废弃物规范处置。

• 避免金属离子与强还原剂干扰：反应体系中避免引入高浓度重金属离子与还原剂，以防荧光淬灭。

五、总结与展望

AF488 NHS 活化酯是绿色荧光标记领域事实上的"金标准"试剂。它把高亮度、高光稳定性、宽 pH 适应性与良好水溶性集于一身，同时以 NHS 酯提供可靠、温和、高效的氨基偶联能力，使抗体、蛋白、核酸等生物分子的荧光标记变得普适而可重复。在免疫荧光、流式细胞术、FISH、活细胞成像与超分辨显微等主流场景中，AF488 体系已成为无数实验方案的默认选择。