技术指标
外观：黄色无定型冻干粉末；蛋白纯度：≥90%；比活性：≥8U/mg酶粉；过氧化氢酶：≤0.001%；胆固醇酯酶：≤0.01%；葡萄糖氧化酶：≤0.01%；ATP酶：≤0.005%
酶学性质
来源：微生物，胆固醇氧化酶；分类：EC1.1.3.6；分子量：60kDa(SDS-PAGE)；等电点：5.6；Km值：3.3×10-4M(Cholesterol)；抑制剂：SDS，Ag+，Zn2+，Hg2+；最适pH：7.0；最适温度：50℃；pH稳定性：pH5.5-10(25℃,16h)；热稳定性：40℃以下稳定（pH7.0,30min）；稳定性：-20℃静置保存12个月保持90%以上活性；保护剂：BSA以及非离子型表面活性剂。
用途：用于高、低密度脂蛋白胆固醇试剂的研发和大量配制。
酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化生成1μmolH2O2所需的酶量。
试剂准备
试剂I：0.1M磷酸钾缓冲液，pH6.5。
试剂II：在500ml烧杯中加入5mLTritonX-100和0.5g胆固醇，用保鲜膜密封，用微波炉加热至胆固醇完全溶解。缓慢加入90mL双蒸水，加热并使其沸腾30-60s，溶液将变浑浊。用自来水淋洗使溶液冷却，冷却后的溶液会变澄清，若冷却后未变澄清则需要重新加热使其完全溶解。在澄清的溶液中加入0.4胆酸钠，用双蒸水定容至100mL。定容后用0.22um滤膜过滤，此溶液在室温下一周内稳定。如果该溶液变浑浊，可轻微加热使其澄清。
试剂III：纯水配制100U/mLPOD。
试剂IV：50mM4-AA溶液（1.016g4-AA溶于100mLUP水）。
试剂V：50mMTOOS溶液（1.477gTOOS溶于100mLUP水）。
酶稀释液：20mM磷酸钾缓冲液，pH7.0，含0.2%BSA。
样品：用酶稀释液将酶稀释至0.05-0.2U/mL。
操作步骤
1.将反应混合物置于37℃水浴锅预热；
2.向1mL比色皿中加入0.9mL反应混合物。
3.向反应混合物中加入0.1mL待测酶液，混匀。
4.37℃反应，用分光光度计在555nm检测样品1min内的吸光度变化（ΔAs）
关键字： 胆固醇氧化酶;胆固醇氧化酶（COD）;Cholesterol Oxidase;COD;
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