果胶甲酯化程度测定试剂盒/微量法/96S
测定意义：
植物细胞壁中的果胶是植物初生细胞壁的主要成分，除了起结构支撑、物质运输等作用外，还具有抵抗逆境的作用。果胶甲酯化程度影响了细胞壁的坚韧程度及其抗性。
测定原理：
果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇，甲醇与 2,4-戊二酮反应显色，在 412nm 下测定吸光值；同时半乳糖醛酸在 70℃下与浓硫酸反应生成 5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲酰基-2-呋喃甲酸与 3,5-二甲基苯酚反应产生有色物质，在 450nm 下有最大吸光值。以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值代表果胶甲酯化程度。
自备仪器和用品：
天平、低温离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水、硫酸。测定操作表：甲醇生成量测定：
试剂名称(μL）
空白管
测定管
样本
50
提取液
试剂一
25
混匀，室温静置 30min
试剂二
试剂三
20
混匀，冰浴至紫色褪去，约需要 15-30min
试剂四
水
60
试剂五
200
混匀，60℃反应 15min。取 200 μL 加入 96 孔板，测定 412nm 下吸光值 A测定与 A 空白。△A1=A 测定-A 空白
注 意：
正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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