血磷浓度测定试剂盒/微量法/96S
测定意义:
血磷主要指血中的无机磷,以无机磷盐的形式存在。血浆中钙、磷浓度关系密切,在以 mg/dL 表示时,二者的乘积([Ca]×[P])为 30~40。当([Ca]×[P])>40,则钙和磷以骨盐形式沉积于骨组织;若([Ca] ×[P])<35 则妨碍骨的钙化,甚至可使骨盐溶解,影响成骨作用。血钙和血磷含量的相对稳定依赖于钙、磷的吸收与排泄和钙化及脱钙两种代谢的相对平衡。上述平衡受到维生素 D3 、甲状旁腺素和降钙素等激素的调节。
测定原理:
去除血清中有机磷后,无机磷盐与钼酸铵试剂生成磷钼酸,被硫酸亚铁还原后呈蓝色,在 620nm 有光吸收;通过测定 620 nm 吸光度,计算血液中磷含量。
自备仪器和用品:
离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
血磷浓度测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长到 620 nm,蒸馏水调零。
2. 取出标准液,室温解冻。
3. 血清预处理:吸取 50 μL 血清,加 950μL 试剂一,混匀后室温 8000rpm ,离心 10min,取上清液,待测。
4. 空白管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 50μL 蒸馏水,50μL 试剂一,100μL 试剂三,混匀后静置 10min ,于 620 nm 测定吸光度,记为 A 空白管。
5. 标准管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 50μL 标准液,50μL 试剂一,100μL 试剂三,混匀后静置 10min ,于 620 nm 测定吸光度,记为 A 标准管。
6. 测定管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 50μL 上清液,50μL 试剂一,100μL 试剂三,混匀后静置 10min ,于 620 nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
注 意:
正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
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