亚硝酸还原酶(Nitrite reductase,NiR)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
硝酸还原酶(NiR)是一类能催化亚硝酸盐还原的酶,广泛存在于微生物及植物体内,是自然界氮循 环过程中的关键酶,可以将亚硝酸盐降解为 NO 或 NH3,从而减少环境中亚硝态氮的积累,降低因亚硝酸 盐累积而造成的对生物体的毒害作用。
测定原理:
亚硝酸还原酶可将 NO2—还原为 NO,使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的 NO2—减少,即 540nm 处吸光值的变化可反应亚硝酸还原酶的活性。
自备仪器和用品:
天平、研钵、可见分光光度计、水浴锅、低温离心机、1ml 玻璃比色皿。
酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提取 液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(10 4 个):提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加 入 1ml 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g, 4℃离心 10min,取上清置于冰上待测。
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