过氧化物酶(Peroxidase,POD)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
POD(EC 1.11.1.7)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可催化过氧化氢氧化酚类和胺类 化合物,具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
测定原理:
POD 催化 H2O2 氧化特定底物,在 470nm 有特征光吸收。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(10 4个): 提取液体积(ml)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 提取液),超声波破碎细菌或 细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰 上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1ml 提 取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
测定步骤和加样表:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 470nm,蒸馏水调零。
2、工作液的配制:临用前将试剂一、试剂二、试剂三按照 2.6(ml):1.5(μl):1(μl)的比例混匀; 在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10min 以上;现配现用。
3、在 1ml 玻璃比色皿中加入 50μl 样本和 950μl 工作液,混匀,记录 470nm 下 1min 时吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2。计算ΔA=A2-A1。
注意:
如果ΔA 小于 0.005,可将反应时间延长到 5min。如果ΔA 大于 0.5,可将样本用提取液稀释后测定,计算 公式中乘以相应稀释倍数。
温馨提示:本产品不可用于临床,详询客服。
关键字: 过氧化物酶(POD)检测;
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