Na+k+ ——ATP酶测定试剂盒/分光光度法/24样
测定意义:
Na+K+- ATP 酶广泛分布于植物、动物、微生物和细胞中,可催化 ATP 水解生成 ADP 和无机磷。
测定原理:
Na+K+-ATP 酶分解 ATP 生成 ADP 及无机磷,通过测定无机磷的量来确定 ATP 酶活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤:1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 660nm,蒸馏水调零。
2、酶促反应(在 EP 管中加入下列试剂)
对照管
测定管
试剂一 (μL)
130
90
试剂二(μL)
40
试剂三(μL)
试剂四(μL)
试剂五(μL)
样本 (μL)
200
混匀,37℃(哺乳动物)或 25℃(其他物种)准确水浴 10min
试剂六(μL)
50
混匀,8000g ,25℃离心 10min,取上清液
3 定磷(在 1.5mLEP 管中依次加入下列试剂)
空白管
标准管
0.5μmol/ml 标准磷应用液(μL)
100
上清液(μL)
蒸馏水(μL)
定磷试剂(μL)
1000
混匀,室温放置 30min,在 660nm 处比色。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
上海酶联生物科技有限公司
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