ATP-磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(ATP-PEPCK)试剂盒微板法/96样
产品简介：
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK)属于裂解酶家族，分为两种类型：一类是 ATP 依赖性即ATP－PEPCK（ EC 4.1.1.49），主要存在于开花植物、藻类及部分真菌和细菌中。
另一类是 GTP 依赖性即 GTP－PEPCK（ EC 4.1.1.32），主要存在于哺乳动物、鸟类、鱼类、昆虫、软体动物、扁虫、线虫、眼虫及部分真菌和细菌中。
ATP－PEPCK 催化磷酸烯醇式丙酮酸生成草酰乙酸，进一步在苹果酸脱氢酶的催化下，使NADH 氧化生成 NAD+ ，在 340nm 下测定 NADH 下降速率，即可反映 PEPCK 活性。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体110mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉剂mL×1支 | 4℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加 3.2mL 蒸馏水溶解备用。 |
试剂二 | 粉剂mL×4支 | 4℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，每支加0.3mL 蒸馏水溶解备用。用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，三天内用完。 |
试剂三 | 粉剂 mg×1 支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加1.1mL蒸馏水溶解备用。 |
试剂四 | 液体14mL×1瓶 | 4℃保存 |
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所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、台式离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
ATP-磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（ATP-PEPCK)活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心 10min，
取上清，置冰上待测。
[注]：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1 ：5~10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30
次）；
4℃×12000rpm 离心 10min，取上清，置冰上待测。
[注]：也可按照细菌或细胞数量(104 个)：提取液体积(mL)为 500~1000： 1 的比例进行提取。
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
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