ATP-磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(ATP-PEPCK)试剂盒分光法/48样
产品简介：
磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 (PEPCK)属于裂解酶家族，分为两种类型：一类是ATP 依赖
性即ATP-PEPCK(EC 4.1.1.49),主要存在于开花植物、藻类及部分真菌和细菌中。另一 类是GTP 依赖性即GTP-PEPCK(EC 4.1.1.32),主要存在于哺乳动物、鸟类、鱼类、昆 虫、软体动物、扁虫、线虫、眼虫及部分真菌和细菌中。PEPCK-ATP 催化磷酸烯醇式丙 酮酸生成草酰乙酸，进一步在苹果酸脱氢酶的催化下，使 NADH 氧化生成 NAD+, 在 340nm 下测定 NADH 下降速率，即可反映 PEPCK 活性。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉剂mg×1支 | 4℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加6.2mL蒸馏水溶解备用。 |
试剂二 | 粉剂mg×4支 | 4℃保存 | 每支加0.6mL蒸馏水溶解备用。用不完的试 剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，三天内用完。 |
试剂三 | 粉剂mg×1支 | -20℃保存 | 临用前甩几下使试剂落入底部，再加2.1mL蒸馏水溶解备用。 |
试剂四 | 液体30mL×1瓶 | 4℃保存 |
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所需的仪器和用品：
紫外分光光度计、1mL 石英比色皿(光径1cm)、 台式离心机、可调式移液器、研 钵、冰和蒸馏水。
ATP-磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(ATP-PEPCK)酶活性检测:
建议正式实验前选取2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费!
线粒体制备
①组织样本：
称取约0. 1g 组织，加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离 心 1 0min, 取上清，置冰上待测。
[注]: 若增加样本量，可按照组织质量 (g): 提取液体积(mL) 为1:5~10的比例进行提取。
②细菌/真菌样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取500万细菌或细胞加入1mL 提取液；
冰浴超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20%或200W, 超 声 3s, 间 隔 1 0s, 重 复 3 0次);
4℃×12000rpm 离 心 1 0min, 取上清，置冰上待测。
[注]: 也可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积 (mL) 为500~1000:1 的比例进
行提取。
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上海酶联生物科技有限公司，成立之初，获得国内外酶联免疫同行的大力支持，公司为了感恩于同行无私的帮助，特取意酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA试剂盒）的“酶联”两字，时刻铭记回报社会，公司已制定十年内，将公司打造成国内酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）行业超级航母，并且，这么多年，我们一直是为了这个愿景，坚定不移的努力奋斗着。