NADP磷酸酶(NADPase)测定试剂盒/微量法/96样
测定意义:
NADPase 主要存在于植物组织中,是生物体内唯一催化 NADP+ 降解为 NAD+ 的酶,与 NADK 一起调控NAD 和 NADP 之间的平衡。
测定原理:
NADPase 能够催化 NADP+水解为 NAD+和无机磷的反应,通过测定无机磷的量来测定 NADPase 活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤:酶促反应(在 EP 管中加入下列试剂)
试剂名称(μL)
测定管
对照管
试剂一
120
试剂二
40
37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 5min
样本
蒸馏水
37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)准确反应 30min 后,95℃水浴5min(盖紧,以防止水分散失),冷却后,10000g 25℃离心 5min,取上清
定磷(在 EP 管或 96 孔板中加入下列试剂)
标准管
空白管
0.5μmol/ml 标准磷应用液
20
上清液
定磷试剂
200
混匀,25℃室温放置 30min,在 660nm 处,记录各管吸光值。
1、此法具有微量、灵敏、快速的特点。所以对测定所用试管要求严格,要没有一点磷,若试管放过磷酸或磷酸盐缓冲液,一定要洗得非常干净,要先用洗洁精加水煮,再用自来水冲,最后用蒸馏水冲干净。最好用一次性塑料管或新玻璃管,避免磷污染是检测成败的关键。
2、标准管、空白管和对照管只要做一次即可。
上海酶联生物科技有限公司
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