谷氨酸脱氢酶(GLDH/GDH)测定试剂盒/比色法/48样
测定意义:
体内一氧化氮弥散入血后,很快与氧合血红蛋白结合形成高铁血红蛋白(methemoglobin,MetHb),NO 与MetHb 变化相关,故全血 MetHb 检测近年来受到临床的广泛重视。同时血液中高铁血红蛋白含量的测定对接触芳香族氨基、硝基化合物所引起的中毒性疾病的诊断与治疗,有重要的意义。
测定原理:
谷氨酸脱氢酶( Glutamate dehydrogenase ,GDH)催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起 340nm 吸光度值下降;通过测定 340nm 处吸光度的下降速率,计算 GDH 活性。
实验仪器:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、蒸馏水。操作步骤:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定:
(1) 工作液配制:将试剂二中加入试剂一 50ml 混合溶解,置于恒温水浴锅预温(哺乳动物 37℃;非哺乳动物 25℃) 5min,现用现配。
(2) 测定:取 0.95ml 工作液和 0.05ml 待测粗酶液于试管中,混匀并立即转入 1ml 比色皿,于波长340nm 测得 20 秒时吸光度值 A1 和 5 分钟 20 秒时的吸光度值 A2,计算△ A=A1-A2 。(将样本加入工作液中即进行计时)。
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