马媾疫（Dourine）检测试剂盒（荧光PCR法）
一、 概述与临床意义：
病原体： 马媾疫锥虫，是一种原生动物（寄生虫）。
传播途径： 主要通过交配直接传播。也可通过污染的器械等间接传播。
疾病特征： 典型病程分为三期：
水肿期： 生殖器及其周围皮肤水肿。
丘疹期： 皮肤出现特征性的环形“银元疹”（但并非所有病例都出现）。
神经期： 出现局部皮肤感觉麻痹和运动神经麻痹。
产品名称 | 马媾疫（Dourine）检测试剂盒（荧光PCR法） | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1164 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
检测价值：
早期诊断： 在动物尚未出现典型症状或血清学抗体未达到 detectable 水平时，即可检测到病原体核酸。
鉴别携带者： 对于感染后血清学反应不规律或处于潜伏期的马匹，PCR可以提供更直接的感染证据。
补充血清学方法： 对于血清学结果可疑或需要病原学确认的病例，PCR是强有力的工具。
高灵敏度： 可检测出低水平寄生虫血症的样本。
重要提示： 根据OIE手册，马媾疫的正式诊断主要基于临床症状和血清学检测。PCR法可作为辅助和确认手段。
二、 检测原理
马媾疫锥虫是单细胞真核生物，其检测靶标是基因组DNA。
靶基因选择： 设计针对马媾疫锥虫特异性基因序列的引物和探针，例如特异性基因片段 或动基体DNA 等高度保守且特异的区域。
DNA提取： 从临床样本中提取总DNA。最佳样本通常来自病变部位：
公马： 尿道刮取物、包皮刮取物或水肿液。
PCR扩增与检测：
采用探针法进行实时荧光PCR。
如果样本中存在马媾疫锥虫的DNA，则会发生特异性扩增并产生荧光信号。
结果判读： 通过监测荧光信号和计算Ct值来判断结果。
三、 试剂盒主要组分
PCR反应液： 包含缓冲液、dNTPs、Mg2?等。
酶混合物： 热启动Taq DNA聚合酶。
马媾疫锥虫阳性对照： 含有目标DNA片段。
阴性对照： 无DNA水。
内标： 用于监控样本中是否存在PCR抑制物及DNA提取效率。
四、 操作步骤（简要）
样本采集： 无菌操作采集尿道或阴道黏膜刮取物、病变部皮肤渗出液或血液。
DNA提取： 使用基因组DNA提取试剂盒进行操作。
反应体系配制： 在专用区域混合各组分。
上机扩增： 运行标准PCR程序。
结果分析： 软件自动分析。
五、 结果解读
靶标通道 内标通道 对照结果 结果解释
Ct值 ≤ 临界值 正常扩增 符合预期 马媾疫锥虫核酸检测阳性
无扩增 正常扩增 符合预期 马媾疫锥虫核酸检测阴性
无扩增 无扩增或异常 符合预期 检测无效（需重新检测）
任何情况 任何情况 不符合预期 实验无效
临床解读要点：
阳性结果： 强烈提示当前存在马媾疫锥虫感染。 | | 阴性结果： 不能完全排除感染。可能原因包括：
寄生虫主要局限于组织内，未进入血液循环，导致血液样本检测不到。
病原体载量低或采样部位不当。
六、 注意事项与局限性
采样部位至关重要： 从生殖道病变部位或水肿液取样，检出率远高于血液。
局限性：
检测敏感性： 在慢性期或潜伏期，寄生虫在血液中数量极少，可能导致假阴性。
与OIE方法的关系： 如前所述，PCR法目前主要作为辅助手段，不能替代OIE推荐的血清学方法作为最终诊断依据。阳性结果需结合临床症状和流行病学史进行综合判断。
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