3-磷酸甘油酯酶(GPP)活性试剂盒分光法/24样
产品简介:
3-磷酸甘油酯酶 (GPP,EC3.1.3.21) 催化3-磷酸甘油脱下磷酸根离子形成甘油,是甘
油合成过程中的后一步酶促反应,该酶活性的高低直接决定甘油的生成水平。
本试剂盒采用3-磷酸甘油为底物,用钼酸铵显色剂测定单位时间内酶催化产生的磷酸
根离子的量,进而得出3-磷酸甘油酯酶的活性大小。
试剂盒组成和配制:
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体35mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂一 | 粉剂mg×1瓶 | -20℃保存
| 用前甩几下或离心使粉剂落入底部,临用前加3.6mL蒸馏水溶解备用。用不完的试剂4℃保存。 |
试剂二 | 液体3mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂三
| A:粉体mg×1瓶 | 4℃保存 | 临用前在试剂A中加2.7mL的B液,再加34.8mL的蒸馏水,混匀溶解备用。用不完的试剂4℃保存,若试剂变色则舍弃。 |
| B:液体3mL×1瓶 |
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标准品 | 粉体mg×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲,则用到该试剂 |
[注]: 全程操作需无磷环境;试剂配置好用新的枪头和玻璃移液器等,也可以用一次性塑料器皿,免磷污染。
所需的仪器和用品:
分光光度计、1mL玻璃比色皿(光径1cm)、 可调试移液器、台式离心机、水浴锅、 研钵、冰。
α - 磷酸甘油酯酶(GPP)酶活性检测:
建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!
样本制备:
①组织样本:
取约0 . 1g 组织(水分充足的样本可取0.5g) 到研钵内,加入1mL 提取液,在冰上进 行冰浴匀浆或者液氮研磨。12000rpm,4℃ 离 心 1 0min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 也可以按照组织质量 (g): 提取液体积(mL) 为1:5~10的比例提取。
②细菌/真菌样本:
先收集细菌/真菌到离心管内,离心后弃上清;取500万细菌/真菌加入1mL 提取液;
冰浴超声波破碎细菌/真菌(冰浴,功率20%或200W, 超 声 3s, 间 隔 1 0s, 重 复 3 0次);12000rpm,4℃ 离 心 1 0min, 取上清,置冰上待测。
[注]: 也可按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积 (mL) 为500~1000:1 的比例进
行提取)。
③液体样本:
澄清的液体样本直接检测,若浑浊则离心后取上清液检。
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