几丁质外切酶试剂盒微板法/48样
产品简介：
多种微生物、动物、植物等都可产生几丁质酶，高等植物本身不存在作为真菌细胞壁组分之一的几丁质，但当植物受到病原菌感染时，几丁质酶活性迅速提高。因此该酶与植物对病原微生物的抗性有关，是重要的病程相关蛋白。几丁质酶主要水解几丁质多聚体中β-1,4-糖苷键。依据水解位置的不同可分为几丁质内切酶
和几丁质外切酶，几丁质外切酶作用于几丁质后，生成 N- 乙酰氨基葡萄糖单体，进一步与铁氰化钾反应，于420nm 处检测，进而计算得到几丁质外切酶活性大小。
试剂盒组成和配制：
试剂名称 | 规格 | 保存要求 | 备注 |
提取液 | 液体60mL×1瓶 | ④℃保存 |
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试剂一 | 液体15mL×1瓶 | 4℃保存 |
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试剂二 | 粉体mg×1瓶 | 4°℃保存 | 临用前甩几下使粉体落入底部，再加5mL盐酸充分混匀溶解后，再加5.5mL蒸馏水混匀备用。 |
试剂三 | 液体5mL×1瓶 | 4°℃保存 |
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试剂四 | 粉体g×1瓶 | 4℃保存 | 临用前甩几下使粉体落入底部，再加24mL蒸馏水溶解备用。 |
标准品 | 粉剂×1支 | 4℃保存 | 若重新做标曲，则用到该试剂 |
所需的仪器和用品：
酶标仪、96 孔板、天平、水浴锅、低温离心机、盐酸、蒸馏水。
几丁质外切酶活性测定:
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
样本制备：
①组织样本：
称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液，进行冰浴匀浆，于4℃,12000rpm 离心10min, 取上清置冰上待测。
[注]: 若增加样本量，可按照提取液体积(mL): 组织质量(g)为1:5~10的比例进行提取。
②真菌样本：先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；取500万细胞加入1mL 提取液； 冰浴超声波破碎细胞(功率300w, 超声3秒，间隔7秒，总时间3min); 于 4 ℃ , 12000rpm 离心10min, 取上清置于冰上待测。
[注]: 若增加样本量，可按照提取液 (mL): 细细胞数量(104)为1:500~1000的比 例进行提取。
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