过氧化氢酶(CAT)测定试剂盒(钼酸铵比色法)/分光光度法/24样
测定意义:
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的 H2O2 清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
测定原理:
过氧化氢能氧化 MoO42-成 MoO52-,MoO52-接受氢氧根的电子成键,分子间立即脱水缩合,得到稳定的黄色复合物(H2MoO4·XH2O)n在 405nm 处有强烈吸收峰,其吸光值和过氧化氢浓度成线性关系。测定出体系剩余过氧化氢在 405nm 的吸光值即可反映 CAT 的催化活性。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤:1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 405 nm。
2、在 EP 管中加入下列试剂。
试剂名称(μL)
测定管
空白管
样本
15
试剂一
90
250
试剂二
300
25
混匀,25℃准确反应 2 min
试剂三
795
提取液
混匀,取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿中立即测定 A 空白和 A 测定,ΔA=A 空白-A 测定。空白管只需做一管
注 意:
1 、 预实验若发现酶活性过高(A 测定<0. 1),可用提取液适当稀释样品后测定,并在计算公式中乘以相应稀释倍数。
2 、 若 A 空白<A 测定,一方面可能是酶活性过低,可将反应时间 2 延长到 5min,另一方面可能样本中杂质干扰严重,可将样本稀释 5 倍左右后测定,并在计算公式中代入实际反应时间和乘以相应稀释倍数。
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