预期用途
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，专用于川牛膝(Radix cyathulae)的核酸鉴定检测。适用于科研机构对川牛膝样品的分子鉴定，检测结果仅供科学研究参考，不可用于临床诊断或治疗用途。
产品名称 | 川牛膝探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Cyathulae Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5162 |
检验原理
试剂盒针对川牛膝基因高度保守区域设计特异性引物和探针，通过实时荧光PCR技术对样品中的川牛膝核酸进行特异性扩增和检测。PCR反应过程中，Taq DNA聚合酶在引物引导下沿模板合成新链，同时探针被切割释放荧光信号，仪器实时监测荧光强度变化，实现检测结果的定性和定量分析。
试剂组成
川牛膝扩增液（25μL×1管）
川牛膝反应液（975μL×1管）
阳性质控品（人工合成DNA片段，50μL×1管）
阴性质控品（50μL×1管）
说明书（1份）
注意：不同批号试剂组分不可混用
技术参数
特异性：引物设计严格遵循碱基配对原则，靶基因选择保守区域，确保检测特异性
灵敏度：可检测低至皮克(pg)级模板，理论检测限约3个拷贝
稳定性：-20℃保存条件下有效期12个月
抗干扰性：对样品纯度要求低，粗提DNA/RNA均可作为模板
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI系列（如7500、StepOnePlus等）
MX3000P/3005P
LightCycler系列
Bio-Rad系列（如CFX96等）
Eppendorf系列
自备材料
无核酸酶的1.5mL离心管、0.2mL PCR反应管
滤芯吸头（10μL、200μL、1000μL）
离心机、振荡混合器
移液器及配套枪头
核酸提取试剂盒（推荐配套产品）
样品要求
样品类型
植物组织：新鲜或干燥的川牛膝药材
加工品：含川牛膝成分的粉末、提取物等
采集与保存
植物样品：取约100mg组织，无菌条件下操作
加工品：取代表性样品100-200mg
短期保存：-20℃
长期保存：-70℃（不超过6个月）
运输：2-8℃冰袋运输，避免反复冻融
实验操作流程
样品处理
DNA提取：
采用商品化植物基因组DNA提取试剂盒
取100mg样品加入裂解液，充分匀浆
按试剂盒说明完成DNA提取
提取的DNA建议立即检测或-15℃以下保存
质控品准备：
阳性对照为人工合成DNA片段，直接使用
阴性对照为无核酸酶水
试剂配制（试剂准备区）
反应体系配制（每反应20μL）：
川牛膝反应液 19.5μL
川牛膝扩增液 0.5μL
模板DNA 5μL
分装至PCR反应管，短暂离心
PCR扩增程序设置
仪器通道选择：
检测通道：FAM
参比荧光：None
循环参数：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 采集荧光 |
| 预变性 | 95℃ | 3min | 1 | 否 |
| 扩增 | 95℃ | 15s | 40 | 否 |
| | 55℃ | 30s | 40 | 是 |
结果分析
阈值设定：阈值线高于阴性对照扩增曲线
结果判读：
阳性：Ct值≤35
可疑：35<Ct值≤40（建议重复检测）
阴性：无Ct值或Ct值>40
注意事项
实验分区操作：试剂准备区、样品处理区、扩增区严格分离
防污染措施：使用滤芯枪头，定期清洁工作台
质量控制：每批实验必须包含阴阳性对照
重复检测：可疑结果应重复检测确认
反应体系：严格按照推荐体积配制，避免体系偏差
局限性
检测结果受样品采集、保存和处理方法影响
极低浓度样品可能出现假阴性
高度降解的样品可能影响检测准确性
本试剂盒不适用于川牛膝近缘物种的鉴别
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