H10N8 亚型禽流感病毒核酸检测试剂盒 新品

 产品介绍：

H10N8 亚型禽流感病毒核酸检测试剂盒是一种专门用于体外定性检测样本中 H10N8 亚型禽流感病毒核酸的分子诊断工具。该试剂盒通常基于实时荧光 RT-PCR（逆转录-聚合酶链式反应）技术，能够特异性识别 H10N8 病毒的 HA（H10）和 NA（N8）基因片段。

检测原理

该试剂盒的核心原理是实时荧光 RT-PCR。由于流感病毒的遗传物质是 RNA，检测过程包含逆转录和 PCR 扩增两个关键步骤：

逆转录 (RT): 将样本中提取的病毒 RNA 逆转录成互补的 DNA (cDNA)。

双重/多重荧光 PCR: 试剂盒通常设计为双重反应体系：

FAM 通道 (H10 检测): 使用特异性引物和探针扩增 H10 亚型的 HA 基因。

VIC/HEX 通道 (N8 检测): 使用特异性引物和探针扩增 N8 亚型的 NA 基因。

内标通道 (可选): 部分高端试剂盒会加入内标（Internal Control），通常标记为 ROX 或其他荧光素，用于监控核酸提取和扩增过程是否正常，防止假阴性。

结果判定逻辑：

H10N8 阳性： FAM 通道和 VIC 通道均检测到特异性扩增曲线。

非 H10N8： 仅单通道阳性（可能为其他亚型混合感染或非目标病毒），或双通道均阴性。

�� 典型性能参数

根据同类禽流感病毒检测试剂盒（如 H5/H7/H9 三重检测试剂盒）的技术标准，H10N8 试剂盒的性能参数通常如下：

参数指标  典型数值/范围  说明

检测目标  H10-HA 基因 / N8-NA 基因  特异性识别 H10 和 N8 基因片段

检测方法  荧光 RT-PCR (探针法)  TaqMan 探针技术，特异性高

检测限  1×10³ ～ 1×10⁴ 拷贝/mL  最低可检测浓度

特异性  高  不与 H1N1、H3N2、H5N1、H7N9 等其他流感亚型及常见呼吸道病原体交叉反应

检测时间  约 1.5 - 2 小时  包含 45 个左右的扩增循环

�� 样本类型

适用于多种来源的样本，主要包括：

临床样本： 咽拭子、鼻拭子、痰液、肺泡灌洗液（BALF）、咽漱液。

禽类及环境样本： 禽类泄殖腔拭子、羽毛拭子、笼具表面涂抹物、活禽市场环境污水等。

�� 操作流程简述

样本采集与保存： 使用无菌病毒采样管采集样本，4℃保存并尽快送检；长期保存需置于 -70℃。

病毒 RNA 提取： 使用配套的病毒 RNA 提取试剂盒（如磁珠法或柱提法）从样本液中提取总核酸。

配置反应体系： 将提取的 RNA、PCR 反应预混液（含引物、探针、酶、dNTPs）按比例混合。

上机检测： 将反应管放入实时荧光 PCR 仪（如 ABI 7500），设置荧光通道（FAM 和 VIC）。

结果分析： 根据扩增曲线的 Ct 值（通常阈值设为 35-40）进行判读。

⚠️ 注意事项

生物安全： H10N8 禽流感病毒属于高致病性病原体，所有操作（尤其是病毒培养和高浓度样本处理）必须在生物安全三级（BSL-3）实验室或符合国家规定的加强型 BSL-2 实验室中进行。

防污染： PCR 检测极其灵敏，必须严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、PCR 扩增区），防止扩增产物气溶胶污染导致假阳性。

试剂保存： 试剂盒中的酶和探针通常需在 -20℃ 避光保存，使用前需充分混匀并离心。

临床意义： 该检测结果仅作为临床诊断的辅助依据，不能作为最终确诊的唯一标准，需结合流行病学史（如活禽接触史）、临床表现（发热、咳嗽等）及其他影像学检查综合判断。

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注意事项：

1‌、严防污染‌

‌分区操作‌：必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样，避免气溶胶交叉污染。

‌专用耗材‌：使用无核酸酶的枪头、EP管等，建议使用带滤芯枪头。

‌规范操作‌：加样后立即盖紧管盖，避免试剂外溅。

‌2、保证质量‌

‌样本处理‌：样本采集后应立即冷藏（2-8℃），长期保存需置于-70℃以下，避免反复冻融。

‌试剂保存‌：严格按照说明书要求的温度（通常是-20℃或2-8℃）保存试剂，避免反复冻融。

‌对照设置‌：每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照，监控实验有效性。

3‌、注意安全‌

‌生物安全‌：阳性样本需按生物安全三级标准处理，实验人员需佩戴个人防护装备（PPE）。

‌废弃物处理‌：所有废弃物（包括耗材、样本）需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃