产品介绍:
FluA/FluB/pdmH1N1(HA)/H3N2(HA) 亚型流感病毒核酸检测试剂盒是一种基于多重实时荧光RT-PCR技术的体外诊断工具。该试剂盒能够在一个反应体系中,同时对甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)、2009甲型H1N1流感病毒(pdmH1N1)以及季节性甲型H3N2流感病毒(H3N2)进行定性检测和区分。
产品名称 | FluA/FluB/pdmH1N1(HA)/H3N2(HA) 亚型流感病毒核酸检测试剂盒 | 货号 | AP3027 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
检测原理
该试剂盒采用多重实时荧光RT-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)技术,通常基于TaqMan探针法。
一步法扩增:将逆转录(RT)和PCR扩增在同一管中进行。首先将提取的病毒RNA逆转录为cDNA,随后利用特异性引物和探针进行扩增。
多重荧光标记:反应体系中包含针对不同目标基因的特异性引物和探针,每种探针标记有不同的荧光报告基团(如FAM、VIC/HEX、CY5等):
FluA通用检测:通常靶向甲型流感病毒高度保守的M基因。
FluB检测:靶向乙型流感病毒的NS基因或HA基因。
pdmH1N1检测:靶向2009甲型H1N1病毒特异的HA基因区域,以区分古典猪源H1N1。
H3N2检测:靶向季节性H3N2亚型特异的HA基因区域。
内参质控:试剂盒通常包含人源基因(如RNaseP)的检测,用于监控样本采集质量(是否存在上皮细胞)及排除PCR抑制物的影响。
核心组成
标准试剂盒通常包含以下关键组分:
PCR反应液:含dNTPs、反应缓冲液、针对FluA、FluB、pdmH1N1、H3N2及内参的特异性引物和荧光探针。
酶混合液:含逆转录酶和热启动Taq DNA聚合酶。
阳性对照:含有上述各目标基因片段的混合质粒或假病毒。
阴性对照:无核酸酶的水或缓冲液。
适用样本与操作流程
适用样本类型:
呼吸道样本:口咽拭子、鼻咽拭子、鼻拭子。
体液样本:痰液、肺泡灌洗液等。
标准操作流程:
样本采集:使用专用采样拭子采集患者鼻咽部或口咽部分泌物。
病毒RNA提取:使用病毒RNA提取试剂盒从样本中提取总RNA。
体系配置:将提取的RNA、PCR反应液和酶混合液按比例混合。
上机扩增:在荧光定量PCR仪上运行预设程序(通常包括逆转录、预变性和40个左右的扩增循环)。
结果分析:根据扩增曲线的形状、Ct值及对应的荧光通道判定结果。
�� 结果判读逻辑
检测通道 结果判定 临床意义
FluA (M基因) 阳性 确认为甲型流感病毒感染
FluB 阳性 确认为乙型流感病毒感染
pdmH1N1 (HA) 阳性 确认为2009甲型H1N1流感病毒感染
H3N2 (HA) 阳性 确认为季节性H3N2流感病毒感染
内参 (RNaseP) 阴性 提示样本采集不合格或存在PCR抑制
注:具体通道分配需以各厂家说明书为准。
✨ 产品特点
多重分型:一管反应同时检测甲乙流及甲流主要亚型,实现“一管血(样)多测”,提高效率。
精准分型:能够特异性区分2009 H1N1和季节性H3N2,为临床用药和流行病学调查提供精准数据。
高灵敏度:最低检测限通常可达500 copies/mL,能够检出早期或低载量感染。
快速高效:整个检测流程(含提取)通常在2-3小时内完成。
⚠️ 注意事项与储存
储存条件:试剂盒需在 -20℃ 条件下避光保存,避免反复冻融。
防污染:PCR检测灵敏度极高,操作必须严格分区(试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区),并使用带滤芯的吸头。
结果解读:检测结果为阴性时,不能完全排除感染可能,需结合临床症状、流行病学史和其他检测结果综合判断。
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注意事项:
1、严防污染
分区操作:必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样,避免气溶胶交叉污染。
专用耗材:使用无核酸酶的枪头、EP管等,建议使用带滤芯枪头。
规范操作:加样后立即盖紧管盖,避免试剂外溅。
2、保证质量
样本处理:样本采集后应立即冷藏(2-8℃),长期保存需置于-70℃以下,避免反复冻融。
试剂保存:严格按照说明书要求的温度(通常是-20℃或2-8℃)保存试剂,避免反复冻融。
对照设置:每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照,监控实验有效性。
3、注意安全
生物安全:阳性样本需按生物安全三级标准处理,实验人员需佩戴个人防护装备(PPE)。
废弃物处理:所有废弃物(包括耗材、样本)需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃
关键字: FluA/FluB/pdmH1N1;HA 亚型流感病毒;检测试剂盒;
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