检验原理
本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对肺炎链球菌基因组高度保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性及定量检测。反应体系中若存在目标核酸模板，PCR扩增将释放荧光信号，经仪器分析后可确定样本中肺炎链球菌的载量。
产品名称 | 肺炎链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Streptococcus pneumoniae Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4389 |
产品特点
高灵敏度：优化引物设计，检测限可达10^2拷贝/μL。
特异性强：引物经严格验证，避免与其他病原体核酸交叉反应。
即开即用：预混反应液含PCR所需全部组分（除模板DNA），减少操作步骤。
双重质控：提供阳性对照（DNA片段）和阴性对照（无模板对照，NTC），确保结果可靠性。
宽线性范围：定量检测覆盖5个数量级（10^2~10^7拷贝/μL）。
操作流程
样本处理
临床样本（如痰液、血液、脑脊液）：需先提取DNA，建议使用配套核酸提取试剂盒。
质量控制：提取后DNA需测定浓度及纯度（A260/A280比值1.8~2.0）。
试剂准备
解冻预混液并离心混匀，避免反复冻融。
按以下体系配制反应液（单次反应）：
预混液：10 μL
引物混合液：2 μL
模板DNA：2 μL
无菌水：6 μL
PCR扩增
反应程序（以ABI 7500为例）：
预变性：95℃ 3分钟
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）
溶解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增
结果判读
定性检测：Ct值≤35且溶解曲线为单一峰，判为阳性。
定量检测：根据标准曲线计算拷贝数。
注意事项
实验分区操作，避免气溶胶污染。
阳性对照需独立稀释，严禁直接接触其他组分。
溶解曲线异常可能提示引物二聚体或非特异性扩增，需重新优化条件。
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关键字： 肺炎链球菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;