检验原理
本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对变异链球菌（Streptococcus mutans）基因组高度保守区域设计特异性引物。通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现对靶标DNA的定性和定量检测。
产品名称 | 变异链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Streptococcus mutans Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4391 |
产品特点
高灵敏度：优化的引物设计可检测低至10^2拷贝/μL的靶标核酸。
特异性强：引物经严格验证，不与相近菌种或宿主DNA发生交叉反应。
即开即用：预混反应体系包含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料，用户仅需提供模板DNA。
双重质控：提供阳性对照（标准品DNA片段）和阴性对照（无模板对照，NTC），确保结果可靠性。
宽动态范围：定量线性范围覆盖10^2–10^7拷贝/μL，适用于绝对定量分析。
操作流程
样本处理
口腔样本：采集龈缘菌斑或唾液，使用DNA提取试剂盒分离核酸。
其他样本：血液、组织等需按标准方法提取DNA，建议OD260/280比值1.8–2.0。
试剂准备
解冻预混液于冰上，轻柔混匀后瞬时离心，避免气泡。
按需稀释阳性对照（10倍梯度稀释，建议6个浓度点）。
反应体系配置（20 μL/孔）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2× SYBR Premix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| RNase-free H₂O | 6 |
PCR程序设置
预变性：95℃ 3分钟
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
熔解曲线分析：60–95℃，每0.5℃递增
注意事项
实验分区操作：模板添加与扩增需在不同区域进行，避免污染。
技术重复：建议每组样本设3个复孔，提高数据可靠性。
熔解曲线验证：单一峰值表明扩增特异性，多峰需排除引物二聚体或污染。
储存与有效期
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
有效期：12个月。
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