产品名称 | 小鼠肺成纤维细胞 | 组织来源 | 肺组织 |
英文名称 | Mouse Lung Fibroblasts | 种属 | 昆明小鼠 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2704 |
方法简介 实验室分离的小鼠肺成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的小鼠肺成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 小鼠肺成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠肺成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：C57BL/6小鼠，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠磷酸化IKB alpha(Ser32;36)elisa试剂盒 | CCD-13Lu肺成纤维细胞 |
大鼠可溶性Endoglin(sENG;sCD105)elisa试剂盒 | 兔骨骼肌细胞 |
大鼠臂板蛋白7A(SEMA7A；CD108)elisa试剂盒 | 兔海绵体平滑肌细胞 |
大鼠信号素3A(SEMA3A)elisa试剂盒 | 兔子宫内膜上皮细胞 |
大鼠β干扰素1(IFN-β1)elisa试剂盒 | 小鼠乳腺上皮细胞EpH4-Ev（种属鉴定） |
大鼠β肌动蛋白(β-actin)elisa试剂盒 | 小鼠前列腺上皮细胞 |
猪亮氨酸氨基肽酶（LAP）elisa试剂盒 | 小鼠原代小胶质细胞 |
SW620/5FU人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株细胞专用培养基 | EHHADH基因过表达细胞株 |
SK-MEL-28人皮肤黑色素瘤细胞专用培养基 | ARMCX5基因过表达细胞株 |
猪原代胰腺腺泡上皮细胞专用培养基 | ENTPD1基因过表达细胞株 |
3D4/21细胞专用培养基 | GP5基因过表达细胞株 |
人原代膀胱上皮细胞专用培养基 | CETP基因过表达细胞株 |
小鼠肺成纤维细胞SV40-MES-13细胞专用培养基 | CCDC30基因过表达细胞株 |
786-O细胞专用培养基 | DCLK3基因过表达细胞株 |
冻存复苏：液氮取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，留有少量冰晶取出，酒精擦拭外壁进入超净台。
悬液转移：打开冻存管，将细胞悬液转移至装有肺成纤维细胞完全培养基的 15mL 离心管，轻柔颠倒混匀。
离心去除冻存剂：1000r/min 离心 5min，离心结束，弃去上层全部上清，保留细胞沉淀。
重悬细胞：加入预热肺成纤维细胞完全培养基，吹打沉淀充分打散细胞团，制备单细胞悬液。
接种铺板：细胞计数，按推荐密度接种，十字摇匀培养瓶，细胞均匀铺底。
恒温孵育：放入 37℃、5% CO₂培养箱静置 24h，让细胞充分贴壁。
换液监测：24h 后更换新鲜培养基，2‑3 天换液一次，观察长梭形成纤维细胞形态，汇合 85‑90% 进行传代。
关键字： 小鼠肺成纤维细胞;肺组织;
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