823Cells复苏与冻存方法

2020/3/6 13:51:17

823Cells概述[1]

823Cells是人胃腺癌细胞(低分化),形态特征呈上皮样,生长状态是贴壁生长,RPMI1640+10%FBS中培养,按照1:3传代,2-3天换液一次。在无血清细胞冻存液中保存。

823Cells处理方法[1]

收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100×,200×各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。

823Cells复苏与冻存方法[1]

复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入血清及DMSO,冻存比例为90%FBS+10%DMSO。

主要参考文献

[1] Bo Leng,Xiao-Dan Liu,Qing-Xi Chen;Inhibitory effects of anticancer peptide from Mercenaria on the BGC-823 cells and several enzymes。《FEBS letters》 2005

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