核糖核酸酶 T1(米曲霉)（RNase T1）为白色冻干粉末或硫酸铵混悬液；热稳定性好；活性不依赖金属离子，重金属离子抑制活性；最适pH7.5；2～8℃保存，不耐强碱（pH9易失活）。应用于RNA测序、RNase保护实验；清除DNA、蛋白样品中RNA杂质；蛋白氧化折叠、分子结合模式等分子机制基础研究。
机制研究
Frech C等人研究以核糖核酸酶 T1的C2S/C10N突变体为模型，探究氧化蛋白折叠过程中类天然有序构象形成与二硫键生成之间的相互关系。该蛋白含104个氨基酸，仅存在1对Cys6–Cys103二硫键；还原态下在尿素中解折叠，当NaCl浓度≥1.5M时可形成类天然折叠构象。通过改变尿素、NaCl浓度，研究折叠构象对蛋白与谷胱甘肽之间巯基/二硫键交换反应的影响：当还原蛋白呈类天然折叠态时，蛋白-谷胱甘肽混合二硫键的初始生成速率降低约4倍；该谷胱甘肽修饰会使蛋白稳定性下降约5kJ·mol⁻¹，并造成两个半胱氨酸残基附近局部解折叠，但巯基基团仍彼此靠近，避免了过渡态能垒升高；此时分子内二硫键形成速率提升100倍。结果表明折叠中间体具有低稳定性与高柔性十分重要[1]。
Balaji P.V等人研究借助计算机模拟，确定pGp、ApG、CpG、UpG与核糖核酸酶 T1的结合模式。四种配体均存在两种结合方式：3′- 磷酸占据磷酸结合位点（底物结合模式）；5′-磷酸占据磷酸结合位点（抑制剂结合模式）。后者能量上更占优势，该模式下鸟嘌呤G 和5′-磷酸基团占据位点与5′-GMP结合核糖核酸酶 T1(米曲霉)时一致。pGp的核糖呈C3′-内式构象，糖苷扭转角与核糖核酸酶 T1 (米曲酶)‑5′-GMP复合物中5′-GMP相近，处于顺式范围。据此提出酶切割底物后产物释放机制；Asn98、Tyr45分别构成鸟嘌呤5′-侧磷酸与碱基亚位点，并从立体化学角度解释IN亚位点对腺嘌呤的特异性[2]。
参考文献
[1]Frech C., Schmid FX.. INFLUENCE OF PROTEIN CONFORMATION ON DISULFIDE BOND FORMATION IN THE OXIDATIVE FOLDING OF RIBONUCLEASE T-1[J]. Journal of Molecular Biology,1995,251(1):135-149.
[2]P.V. Balaji, V.S.R. Rao. Computer Modeling Studies on the Subsite Interactions of Ribonuclease T1[J]. Journal of Biomolecular Structure and Dynamics,1992,9(5):971-989. DOI:10.1080/07391102.1992.10507971.