背景[1-3]
人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
GPC-3是过度生长综合症(Simpson Golabi Behmel Syndrome,SGBS)患者中普遍存在的功能突变基因,是蛋白聚糖家族成员之一。GPC-3基因编码的GPC-3蛋白可通过共受体(co-receptor)与相关配基如生长因子、细胞黏附分子等共同作用,来参与细胞生物学行为的调节。有学者认为在细胞生长的各个过程包括细胞的繁殖、黏附、分化、迁移等过程中均存在GPC-3的直接或间接调控。
试剂盒操作步骤:
1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
4.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
5.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
6.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
7.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于前列腺癌中Glypican-3蛋白的表达及意义研究
磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican-3GPC-3）是硫酸乙酰肝素糖蛋白（heparan sulfate ProteoglycanHAPG)家族中的一员。目前认为HAPG中的HS链与生长因子及其受体、细胞外基质蛋白等大量生物效应分子相互作用，参与调节细胞形态及其粘附、增殖、迁移、存活和分化等作用，因此考虑GPC-3可参与上述细胞调节作用。自1996年被发现以来GPC-3，其作为肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma HCC)肿瘤标志物的研究较为广泛。α-胎儿蛋白（AFP）在肝细胞癌中的诊断意义已被充分肯定。Abdelgawad等用ELISA法分析60例样本血清GPC-3和α-胎儿蛋白（AFP）（包括40例肝癌、10例肝硬化病人及10例健康对照），RT-PCR扩增方法检测GPC-3和AFP在mRNA水平的表达并进行分析，结果表明GPC-3在肝细胞癌中的敏感性和特异性均高于AFP。研究显示GPC-3基因在不同癌组织细胞中具有不同的作用和意义。
参考文献
[1]Glypican-3 is a potential prognostic biomarker for hepatocellular carcinoma after curative resection[J].Shun-Jun Fu,Chao-Ying Qi,Wei-Kai Xiao,Shao-Qiang Li,Bao-Gang Peng,Li-Jian Liang.Surgery.2013
[2]Reevaluation of glypican-3 as a serological marker for hepatocellular carcinoma[J].Min Chen,Guohua Li,Jian Yan,Xiuzhi Lu,Jianwei Cui,Zhengxian Ni,Weizhong Cheng,Gengsun Qian,Jing Zhang,Hong Tu.Clinica Chimica Acta.2013
[3]Overexpression of GPC3 inhibits hepatocellular carcinoma cell proliferationand invasion through induction of apoptosis[J].Zhijian Pan,Chunzhou Chen,Haocheng Long,Changjiang Lei,Gang Tang,Lei Li,Jiarui Feng,Feixiang Chen.Molecular Medicine Reports.2013(3)
[4]Glypican-3 expression in gastrointestinal and pancreatic epithelial neoplasms[J].Taofic Mounajjed,Lizhi Zhang,Tsung-Teh Wu.Human Pathology.2012
[5]李勇.前列腺癌中Glypican-3蛋白的表达及意义[D].河北医科大学,2014.