人尿蛋白(UP)ELISA KIT的应用

2020/7/9 9:33:25

背景[1-3]

人尿蛋白(UP)ELISA KIT应用双抗体夹心法测定标本中人尿蛋白(UP)水平。用纯化的人尿蛋白(UP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人尿蛋白(UP),再与HRP标记的人尿蛋白(UP)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人尿蛋白(UP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人尿蛋白(UP)浓度。尿内出现蛋白称为蛋白尿,也即尿蛋白。正常尿液中含少量小分子蛋白,普通尿常规检查测不出,当尿中蛋白增加,尿常规检查可以测出即为蛋白尿。蛋白尿是肾脏病的常见表现,全身性疾病亦可出现蛋白尿。

尿蛋白偏高是指尿液中的蛋白质含量偏高,蛋白质漏进尿液从尿道排出来形成了蛋白尿。尿蛋白越高说明肾脏滤过功能越差,这是衡量肾脏功能的重要指标。正常情况下,人体尿液里不含蛋白质或只含有微量蛋白质,但当肾脏发生病变时,随血液循环流动的蛋白质流经肾脏时,因为肾脏滤过功能的降低而使蛋白质“漏网”。尿蛋白偏高的原因考虑最多的应该是肾病,因为肾病最容易导致尿蛋白。正常的情况下,蛋白都会回吸收的,如果肾脏出现损伤的情况下,根据肾脏纤维化发展原则即肾脏纤维化开始启动,肾脏出现回吸收的功能下降,就会漏出一些蛋白,从而导致尿蛋白的产生,出现尿蛋白偏高。

应用[4][5]

人尿蛋白(UP)ELISA KIT用于紫癜性肾炎患儿血清及尿液中骨膜蛋白表达水平及意义研究。

骨膜蛋白(periostin)与紫癜性肾炎(Henoch-Schonlein purpura nephritis,HSPN)之间的关系,以及血清、尿液中骨膜蛋白与肌酐、尿素、胱抑素C、24h尿蛋白定量、人尿微量白蛋白的相关性,采用ROC曲线评价血清、尿液中骨膜蛋白在紫癜性肾炎中价值,探讨血清及尿骨膜蛋白与紫癜性肾炎发生之间的关系。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定研究对象血清及尿液中骨膜蛋白的水平。分别比较HSPN组、HSP组和正常对照组血清及尿骨膜蛋白的表达水平,并比较血清及尿骨膜蛋白与临床常用指标的相关性,采用ROC曲线评价骨膜蛋白对紫癜性肾炎的价值。

结果:1.HSPN组、HSP组、正常对照组血清骨膜蛋白平均浓度分别为(50.02±8.88)pg/ml,(41.68±8.26)pg/ml,(36.99±8.34)pg/ml,三组间差异具有统计学意义(F=18.081,P<0.001),两两之间比较:HSPN组与正常对照组、HSP组与正常对照组、HSPN组与HSP组比较,差异均有统计学意义(P<0.001、P<0.001、P<0.05)。2.HSPN组、HSP组、正常对照组尿骨膜蛋白平均浓度分别为(34.94±3.04)pg/ml,(31.75±1.91)pg/ml,(31.00±1.99)pg/ml。尿骨膜蛋白水平在三组间差异具有统计学意义(F=23.405,P<0.001),两两之间比较:HSPN组与正常对照组、HSPN组与HSP组相比,差异有统计学意义(P<0.001、P<0.001),HSP组与正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。3.HSPN组尿骨膜蛋白与24小时尿蛋白定量(r=0.810,P<0.001)、人尿微量白蛋白呈正相关(r=0.735,P<0.001),与尿素、肌酐、尿酸、胱抑素C无相关性;HSPN组血清骨膜蛋白与人尿微量白蛋白呈正相关(r=0.396,P=0.030),与24小时尿蛋白定量、尿素、肌酐、尿酸、胱抑素C均无相关性。

参考文献

[1]The usefulness of measuring tear periostin for the diagnosis and management of ocular allergic diseases[J].Hiroshi Fujishima,Naoko Okada,Kenji Matsumoto,Kazumi Fukagawa,Ayako Igarashi,Akio Matsuda,Junya Ono,Shoichiro Ohta,Hideki Mukai,Mamoru Yoshikawa,Kenji Izuhara.The Journal of Allergy and Clinical Immunology.2015

[2]Periostin:a novel tissue biomarker correlates with chronicity index and renal function in lupus nephritis patients[J].P Wantanasiri,B Satirapoj,M Charoenpitakchai,P Aramwit.Lupus.2015(8)

[3]Renal Allograft Fibrosis:Biology and Therapeutic Targets[J].P.Boor,J.Floege.American Journal of Transplantation.2015(4)

[4]Distinct protein signature of hypertension-induced damage in the renal proteome of the two-kidney,one-clip rat model[J].Heidrun Vethe,Kenneth Finne,Trude Skogstrand,Marc Vaudel,Bj?rn E.Vikse,Michael Hultstr?m,Sandrine Placier,Andreas Scherer,Olav Tenstad,Hans-Peter Marti.Journal of Hypertension.2015(1)

[5]霍丽娇.紫癜性肾炎患儿血清及尿液中骨膜蛋白表达水平及意义[D].河北大学,2019.

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