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石蜡油与人类辅助生殖技术

发布日期:2020/7/22 15:02:35

以石蜡油(培养油)覆盖培养液用于人类受精卵和胚胎的体外培养已经行之有年, 该项技术可有效避免在体外培养过程中培养液的蒸发损失,且覆盖的石蜡油使得培养液和外部环境相互隔离, 有效避免温度和pH值等在辅助生殖技术操作时产生波动, 保持培养液内环境相对稳定和防止污染。

然而移植前胚胎对其发育环境极为敏感,因此与培养液直接接触的石蜡油也会对胚胎发育产生影响(石蜡油的水溶性成分可扩散到培养液中),国内研究人员为此开展了动物试验,选取了三家厂商的四种石蜡油、观察其对水牛孤雌胚胎体外培育的影响,结果显示四种石蜡油对胚胎体外培育存在不同程度的影响,其中C公司石蜡油(过滤)对胚胎培育的效果最佳。

四种石蜡油对水牛孤雌胚胎体外培育的影响

该试验结果与早年海外的研究结果相类似,当时国外的研究人员比较了未经洗涤和经洗涤后的两种石蜡油对微滴培养系统中鼠胚发育的影响,结果也显示经洗涤后的石蜡油组的鼠胚发育更优。

进一步分析天然石蜡油所含成分,我们发现其中含有胚胎毒性物质,这些物质具有亲水特性、易于扩散进入培养液中,而石蜡油的密度、黏性也会影响胚胎毒性物质扩散进入培养液中的速率和量,最后由于胚胎体外培养往往采用微滴模式、培养液的用量较少而石蜡油覆盖后的接触面积相对较大、使得石蜡油中的胚胎毒性物质更易于扩散进入培养液。

因此须对石蜡油进行洗涤和过滤,去除其中的有害成分,才能安全地使用于人类辅助生殖技术中,其品质需经过鼠胚试验和人精子存活试验的验证。
人精子存活试验。该试验采用优化处理后活力保持在90%以上的人类精子,根据待测石蜡油的功能和特性,在相应培养环节使用待测石蜡油后,经37度培养24 小时后与对照石蜡油组比较,观察待测组的精子活力是否显著下降,从而评价待测石蜡油的品质和潜在毒性。

试验用仪器

精子计数板、恒温台、光学显微镜、计数器、计时器、温度计、水平式离心机、超净工作台、二氧化碳培养箱等。
重要评价指标

01. 精子活力,以前向运动精子所占全部精子的百分率表示(前向运动是指精子主动地呈线性或沿一大圆周运动,不考虑速度);

02. 精子活力系数,经过一定培养时间后的精子活力与培养开始时精子活力的比值,反映精子活力的变化情况;

03. 相对精子活力系数,相同培养时间,试验组精子活力系数与对照组精子活力系数的比值,反映试验组对精子活力的影响程度。

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