脯氨酸含量测定试剂盒(可见光分光光度法)的应用

2020/9/23 14:27:35

背景[1-3]

脯氨酸含量测定试剂盒(可见光分光光度法)是将脯氨酸经磺基水杨酸(SSA)提取后,与酸性茚三酮反应生成红色物质,产物经甲苯萃取,在520nm下测定吸光值变化,即可计算出样品中脯氨酸的含量。

脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,可作为细胞质渗透压调节物质,还在稳定生物大分子结构、降低细胞酸性、解除氨毒、调节细胞氧化还原势以及提高植物的抗逆性等方面起重要作用。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性,可以作为抗逆育种的生理指标之一。

样品测定的准备:

1、细胞、细菌或组织样品的制备:细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每100万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),之后置沸水浴振荡提取10min;10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。

2、组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。

3、血清(浆)样品:取100μL血清(浆)加入0.9mL提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取10分钟,10000g,常温离心10分钟,取上清,冷却后待测。标准品的处理:称取1mg,将标准品稀释为15、10、8、6、4、2、1、0μg/ml。

测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,甲苯调零。

2、取0.5mL上清液(或稀释后的标准品)+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二于有盖试管中,置沸水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。

3、待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转至试剂三中;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,于520nm波长处比色,记录吸光值。

4、根据标准品吸光值和浓度,建立标准曲线。

应用[4][5]

用于脯氨酸代谢在甘菊和切花菊抵御非生物胁迫中的作用机制研究

利用脯氨酸代谢调控机制进行菊花(Chrysanthemum×morifolium Ramat.)的抗逆性改良,本研究利用比较基因组学的方法,对抗逆性强的菊属近缘野生种—甘菊[Chrysanthemum lavandulifolium(Fisch.ex Trautv.)Makino]和耐盐性不同的切花菊品种—‘雪山’(C.×morifolium’Xueshan’)、‘粉贵人’(C.×morifolium’Fenguiren’)和‘神马’(C.×morifolium’Jinba’)的游离脯氨酸积累特点、脯氨酸代谢相关基因表达模式及关键基因的功能进行研究,以期为脯氨酸代谢在菊花响应逆境胁迫及生长发育中的价值予以更清晰的评价,为菊花抗逆性研究和分子育种奠定基础,同时也为高等植物脯氨酸代谢调控机制的研究提供新的证据。

得到的主要结果如下:(1)对甘菊在非胁迫及干旱、盐、冷、热胁迫下中部叶片中游离脯氨酸含量的测定发现,甘菊中部叶片中游离脯氨酸含量在胁迫后期(冷胁迫除外)急剧增加。对甘菊不同器官中游离脯氨酸含量的测定发现,非胁迫下,甘菊花蕾和花序中游离脯氨酸含量最高;不同胁迫条件下,游离脯氨酸在最易受到胁迫伤害的器官中增加最为明显,且含量较高。

(2)比较分析不同程度盐胁迫下切花菊品种—‘雪山’、‘粉贵人’和‘神马’不同器官中的游离脯氨酸水平发现,三者游离脯氨酸含量的变化特点存在明显差异:耐盐性强的切花菊‘神马’和‘粉贵人’能够在盐胁迫后期有效积累脯氨酸。盐胁迫后期3个切花菊品种中部叶片中的游离脯氨酸含量显著低于甘菊中部叶片中的游离脯氨酸含量。与甘菊中相同,盐胁迫下3个切花菊品种根和茎中的游离脯氨酸显著增加,且明显高于叶片中的游离脯氨酸含量。

参考文献

[1]Responses of supplemental blue light on flowering and stem extension growth of cut chrysanthemum[J].Sung Woo Jeong,Sander W.Hogewoning,Wim van Ieperen.Scientia Horticulturae.2014

[2]Construction and de novo characterization of a transcriptome of Chrysanthemum lavandulifolium:analysis of gene expression patterns in floral bud emergence[J].Yi Wang,He Huang,Yueping Ma,Jianxin Fu,Linlin Wang,Silan Dai.Plant Cell,Tissue and Organ Culture(PCTOC).2014(3)

[3]Is proline accumulation per se correlated with stress tolerance or is proline homeostasis a more critical issue?[J].POLAVARAPU B.KAVI KISHOR,NESE SREENIVASULU.Plant Cell Environ.2014(2)

[4]Cold acclimation induces freezing tolerance via antioxidative enzymes,proline metabolism and gene expression changes in two chrysanthemum species[J].Yu Chen,Jiafu Jiang,Qingshan Chang,Chunsun Gu,Aiping Song,Sumei Chen,Bin Dong,Fadi Chen.Molecular Biology Reports.2014(2)

[5]张蜜.脯氨酸代谢在甘菊和切花菊抵御非生物胁迫中的作用机制[D].北京林业大学,2014.

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