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没有异戊烷怎么做空间转录组?

发布日期:2020/12/9 17:03:22
各位有做空间转录组想法的伙伴们,还在为买不到易燃易爆的异戊烷犯难吗?还在为异戊烷纯度不够烦恼吗?还在为解决不了异戊烷的问题实验停滞不前吗?今天,跟大家分享几种空间转录组组织包埋的方法,没有异戊烷也可以冷冻组织哟~

组织不应直接置于液氮中,因为温度差可能会导致组织表面沸腾,从而导致气穴和不均匀的冷冻这可能会破裂并在形态上破坏组织。如果您有异戊烷且纯度足够高的话,还是推荐您用异戊烷进行组织冷冻的,具体方法如下:

a.用异戊烷(足以完全浸没组织)填充三分之二的金属烧杯,然后放入液氮杜瓦瓶中(与异戊烷相同的高度)以充分接触,孵育 15 分钟。

b.将新鲜组织置于培养皿中,用干净的纱布或者纸巾吸干组织周围血水,尽量使组织表明干燥。

c.标记冷冻模具以标记组织的方向,用预冷的 OCT 填充模具,避免产生气泡。

d.用镊子将组织放入含预冷OCT的模具中,用OCT 覆盖任何裸露组织的表面,确认没有气泡,尤其是在组织附近。

e.用镊子将模具放到异戊烷中,但不要使异戊烷浸入模具内,直到组织冻结。冷冻时间可根据组织类型和大小而变化。

f.冷冻后,将组织转移到预冷的冷冻管中,然后放在干冰上。

g.将 OCT 包埋的组织块保存在–80℃的密封容器中,以便长期保存,或立即进行冷冻切片

如果您的新鲜样本打算直接进行空间转录组实验,且实验室没有异戊烷的话百迈客在这里给您推荐直接用干冰粉进行组织冷冻包埋,具体方法如下:

a.直接准备干冰粉或用研钵将干冰块研磨成粉

b.将新鲜组织置于培养皿中,用干净的纱布或者纸巾吸干组织周围血水,尽量使组织表明干燥。

c.标记冷冻模具以标记组织的方向,用预冷的 OCT 填充模具,避免产生气泡

d.用镊子将组织放入含预冷OCT的模具中,用OCT 覆盖任何裸露组织的表面,确认没有气泡,尤其是在组织附近。

e.将组织放入干冰粉中,直到组织冻结。此方法冷冻包埋组织较慢,且须在干冰粉上静置一段时间,确保组织冷冻均匀,约需30分钟。

f.冷冻后,将组织转移到预冷的冷冻管中,然后放在干冰上。

g.将 OCT 包埋的组织块保存在–80℃的密封容器中,以便长期保存,或立即进行冷冻切片。

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