你真的了解考马斯亮蓝吗

2021/2/9 14:45:17

1、考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,光吸收在465nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。

2、Bradford定量。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。

3、考马斯亮蓝溅到皮肤怎么办?

考马斯亮蓝和皮肤中蛋白质通过范德华力结合,反应快速,并且稳定,无法用普通试剂洗掉。待一两周左右,皮屑细胞自然衰老脱落即可无碍。

4、各种蛋白染色方法的灵敏度比较。

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5、如何加快染色和脱色速度。

(1)染色和脱色都可以在微波炉中加热甚至煮沸,很省时间。但注意不要沸腾时间太长,否则容易把胶上煮出泡状的破损。(2)若为了提高考染及脱色速度,可在45℃左右的水浴中进行,染色时间只需几分钟(其间轻轻晃动一二次,整个胶变为较深的亮兰色即可)。脱色也在水浴中(约需15分钟)(3)胶放入用乙醇-乙酸配成的脱色液后微波加热10秒钟至微热,上摇床,10分钟后,倒掉,换新的脱色液重复一次,不超过半个小时也好了.(4)用乙醇和乙酸配脱色液,然后加热脱色,很快的,可加热到马上要沸腾为止。不但脱色可以,染色也可加热,速度也很快(5)用蒸馏水洗胶,并放在微波炉里加热,效果很好。只是要掌握好时间,时间太长而蛋白的含量又比较低的话,容易脱过了!(6)加入甲醇-乙酸脱色液后,将其直接放到微波炉里加热一分钟,然后放几张干净的tissue进去(把它叠成条状,沾在脱色皿边上就OK啦!(不要和胶混在一起)),能吸去很多染料,加快脱色,效果不错。

6.注意问题。

(1)胶脱色不能脱的太久,虽然越脱越清楚,但脱的太久了,弱带就看不见了,胶也会变的失真,这样的胶照出的照片是很难被接受的。如果样品条带或点不是很浓,就不可以脱太久。但如果要拍照,最起码要保证底色脱完全,要不然照片效果也不会好的。(2)如果需要长时间脱色,注意要换脱色液,且量要足够,否则甲醇挥发很快,胶容易干卷.把本底脱干净后可以把胶放水中保存.半个月应该没问题;长期保存可以在水中加20%的甘油。也有同行经验:考染不能长时间保存,尤其是在水里,3天颜色就会溶到水里。具体情况要自己摸索了。
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