背景[1-3]
三羟基三甲基辅酶A裂解酶抗体可以特异性结合三羟基三甲基辅酶A裂解酶的一类多克隆抗体，主要用于三羟基三甲基辅酶A裂解酶的体外检测实验。
三羟基三甲基辅酶A裂解酶抗体是兔抗HMGCL多克隆抗体，采用蛋白A亲和纯化方法制成，可与人、小鼠、大鼠、鸡、狗、马、兔源的三羟基三甲基辅酶A裂解酶产生特异性结合，短期4℃运输即可，长期应存储于-20℃，避免反复冻融，三羟基三甲基辅酶A裂解酶表达于细胞浆，分子量为32kDa，应用于肿瘤、细胞生物、免疫学、信号转导、脂蛋白、线粒体等科研领域。
三羟基三甲基辅酶A裂解酶结构图
羟甲基戊二酰辅酶A裂解酶（HMGCL）是一种线粒体基质蛋白，是HMG-CoA裂解酶家族的成员。HMGCL是同型二聚体，参与亮氨酸分解代谢和生酮作用，即酮体的肝脏合成，在禁食期间为心脏，大脑和肾脏提供主要能量来源。更准确地说，HMGCL催化这些过程的最后一步，即将3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A裂解为乙酰乙酸和乙酰辅酶A。
HMGCL的缺陷是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A裂解酶缺乏症（HMGCLD）的原因；也称为羟甲基戊二酸尿症或HL缺乏症。常染色体隐性遗传疾病，影响生酮作用和L-亮氨酸分解代谢。该疾病通常在禁食期后的年出现，其临床急性症状包括呕吐，癫痫发作，代谢性酸中毒，低酮症性低血糖症和嗜睡。这些症状有时会变得昏迷，在某些情况下会导致致命的后果。
应用[4][5]
用于酮体代谢关键基因抑制肾透明细胞癌增殖和转移的研究
探索ACAT1,BDH2和HMGCL基因在肾透明细胞癌中的转录表达水平,及其对酮体代谢的调控作用,探究ACAT1,BDH2和HMGCL的异常表达对肾透明细胞癌恶性生物学行为的影响。
研究方法:1.通过生物信息学的方法,运用GCBI平台、TCGA数据库和GEPIA网站分析ACAT1、BDH2和HMGCL在肾透明细胞癌m RNA转录水平以及与临床参数的关系。
2. 分别通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色法分别验证ACAT1、BDH2和HMGCL在肾透明细胞癌c DNA芯片中和肾透明细胞癌组织芯片中的转录和表达情况。
3. 构建外源性过表达ACAT1、BDH2和HMGCL的肾透明细胞癌细胞系,通过CCK-8实验绘制生长曲线,2D细胞迁移实验和3D细胞侵袭实验来检测ACAT1、BDH2和HMGCL基因对肾透明细胞癌中的恶性肿瘤生物学的影响。
4. 检测外源性过表达ACAT1、BDH2和HMGCL的肾透明细胞癌细胞系细胞中的酮体含量。
5. 利用外源性酮体处理肾透明细胞癌细胞系,通过CCK-8实验来验证外源性酮体对肾透明细胞癌细胞系增殖能力的影响。
研究结果:1.ACAT1、BDH2和HMGCL基因在肾透明细胞癌中表达水平下调。通过分析生物信息学数据,结果发现相比于正常肾脏组织,ACAT1、BDH2和HMGCL在肾透明细胞癌组织中表达下调。而且ACAT1、BDH2和HMGCL的表达量与肾透明细胞癌的生存和预后相关。
进一步通过RT-q PCR验证ACAT1、BDH2和HMGCL基因在肾透明细胞癌组织中转录表达水平低于癌旁组织,差异具有统计学意义。
进一步利用免疫组织化学染色方法,比较90例肾透明细胞癌和90例癌旁组织,发现在癌组织中ACAT1、BDH2和HMGCL蛋白表达水平显著低于癌旁组织,两者之间差异具有统计学意义。
参考文献
[1]Cancer statistics,2019[J].Rebecca L.Siegel MPH,Kimberly D.Miller MPH,Ahmedin Jemal DVM,PhD.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2019(1)
[2]Diverse roles of fatty acid binding proteins（FABPs）in development and pathogenesis of cancers[J].Mina Amiri,Saghar Yousefnia,Farzad Seyed Forootan,Maryam Peymani,Kamran Ghaedi,Mohammad Hossein Nasr Esfahani.Gene.2018
[3]Role of FABP7 in tumor cell signaling[J].Yoshiteru Kagawa,Banlanjo A.Umaru,Islam Ariful,Subrata Kumar Shil,Hirofumi Miyazaki,Yui Yamamoto,Masaki Ogata,Yuji Owada.Advances in Biological Regulation.2018
[4]MicroRNAs as predictive biomarkers of response to tyrosine kinase inhibitor therapy in metastatic renal cell carcinoma[J].Julia Kovacova,Alexandr Poprach,Tomas Buchler,William C.Cho,Ondrej Slaby.Clinical Chemistry and Laboratory Medicine（CCLM）.2018(9)
[5]崔万猛.酮体代谢关键基因抑制肾透明细胞癌增殖和转移的研究[D].广西医科大学,2019.