背景[1-3]
血琼脂基础培养基加有去纤维蛋白动物血液的培养基，用于培养葡萄球菌、链球菌等以及细菌溶血试验。
原理：多价胨提供碳氮源、维生素和生长因子；淀粉能促进奈瑟氏菌的生长和增强链球菌的溶血特性；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂。
血琼脂基础培养基
配方（每升）：蛋白胨：10g；牛肉浸出粉：10g；氯化钠：5g；琼脂：15g；最终pH 7.4±0.2
使用方法：
1、称取本品39g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min。
2、待培养基冷至50℃左右，以无菌手续，每100mL基础培养基加入脱纤维羊血或兔血5—10mL，摇匀倾注平板；亦可分装灭菌试管置成斜面。备用。
3、取待检菌的新鲜纯培养物划线或涂布接种在平板上，置培养要求温度的培养箱进行规定时间的培养。
4、观察结果。
链球菌需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。营养要求较高。普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。最适温度37℃，最适PH7.4～7.6，血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。
肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌均产生α溶血环。肺炎链球菌可产生自溶酶，因此平板培养48小时候，菌体可自溶，菌落中央下陷呈脐状；若是在液体培养基中培养，液体初期呈浑浊状态，继而逐渐变澄清。
应用[4][5]
用于CP5型金黄色葡萄球菌荚膜多糖的提取纯化与鉴定研究
选取荚膜多糖5型金黄色葡萄球菌,通过细菌培养,提取、纯化和鉴定其荚膜多糖,为进一步了解荚膜多糖在细菌生物学上的作用和免疫学用途做准备。
方法:细菌在50个哥伦比亚血琼脂基础培养基平板上24h培养后用磷酸缓冲液生理盐水收集。菌液经121℃,1h高温高压处理后25,000×g离心沉淀,收集上清液。无水乙醇30%（V/V）4℃过夜,离心去除沉淀。
上清液加入核糖核酸酶A和脱氧核糖核酸酶Ⅰ,37℃过夜,链霉蛋白酶和蛋白酶K 37℃过夜。12～14KDa截留分子量透析袋三蒸水透析。无水乙醇80%（V/V）4℃过夜,离心收集沉淀,得有粘稠感白色粗荚膜多糖。
加入PBS,溶解粗提物,高碘酸钠黑暗处常温处理,用25%（V/V）乙二醇终止反应,三蒸水透析。超滤离心管去除大于100KDa和小于50KDa物质。30KDa和10KDa超滤管浓缩样品,葡聚糖纤维纯化荚膜多糖,紫外光分光光度计490nm检测,含多糖样品低压冻干保存。
结果:苯酚-硫酸法测定粗制荚膜多糖样品含糖量为:26.15μg/ml,即29.88%;核酸蛋白仪测定核酸含量为0.1113 mg/ml,蛋白质含量为0.0103 mg/ml;高效液相色谱鉴定样品多糖的单糖主要组成成分为:甘露糖、岩藻糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸,葡萄糖、半乳糖、木糖及阿拉伯糖。
参考文献
[1]Method for the serological typing of the capsular polysaccharide ofStaphylococcus aureus.Karakawa,WW,Foumier,JM,Vann,WF,Arbert,R,Schneerson,RS,Robbins,JB.Journal of Clinical Microbiology.1985
[2]Protective efficacy of antibodies to the Staphylococcus aureus type 5 capsular polysaccharide in a modified model of endocarditis in rats.Lee,JC,Park,J-S,Shepherd,SE.Infection and Immunity.1997
[3]Immunochemical Properties of the Staphylococcal Poly-N-Acetylglucosamine Surface Polysaccharide.Maira-Litran T,Kropec A,Abeygunawardana C,Joyce J,Mark G rd,Goldmann DA,Pier G B.Infection and Immunity.2002
[4]Phagocytosis of mastitis isolates of Staphyloco-ccus aureus and expression of type 5 capsular polysaccharide are influenced by growt-h in the presence of milk.Sutra L,Rainard P,and Poutrel B.Journal of Clinical Microbiology.1990
[5]严胜平.CP5型金黄色葡萄球菌荚膜多糖的提取纯化与鉴定[D].华中农业大学,2008.