背景[1-3]
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型)可用于比色皿法检测，也可用于微孔板法检测。前者虽需较大量（100μl）的蛋白样品，但由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:20（v/v），从而降低干扰物质带来的影响。后者操作简单方便，仅需少量（10-25μl）的蛋白样品。不过，由于其在检测中使用蛋白样品与BCA工作液的比率为1:8（v/v），某种程度上限制干扰物质的承受浓度以及降低最低检测水平。
BCA蛋白浓度测定结果
BCA（Bicinchoninic acid）法是目前应用比较广泛的蛋白质浓度测定方法。基于双缩脲反应，即在碱性环境下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，产生一种紫蓝色复合物，在562nm处有高的吸光值，该反应产物的量与蛋白质浓度成正比。BCA蛋白浓度测定法实现了蛋白质浓度测定的简便、灵敏、快速和稳定性。试剂盒中提供的蛋白标准品为用户制作标准曲线提供了便利。
产品特点：
1)灵敏度高，最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达到10μg/ml。
2)速度快，比一般的BCA蛋白浓度测定试剂盒显色所用时间短。比传统的Lowry法检测速度约快4倍。
3)线性范围广，20-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性范围。
4)不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80等。
应用[4][5]
用于多肽浓度测定方法的比较研究与应用
将牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）与固相合成环肽CYE（NH2-CYENLRSTC-COOH,C1-C9二硫键成环）、CLP（NH2-CLPLWYPSC-COOH,C1-C9二硫键成环）及CHY（NH2-CHYPTYSKC-COOH,C1-C9二硫键成环）溶液梯度稀释后分别使用消光系数法和BCA法进行吸光度测定,通过消光系数公式或标准曲线方程式计算相应浓度值,比较浓度计算值与理论值之间的差异并计算测定方法的精密度。
将对羟磷灰石粉末可能有不同亲和力的多肽CYE与1018（VRLIVAVRIWRR）溶液进行梯度稀释,以非特异性吸附的BSA为对照,分别与25mg/mL羟磷灰石悬浮液在37℃下共同孵育1小时,离心后取上清液并应用个性化标准曲线的BCA法进行浓度测定,根据浓度计算结果评价BSA、CYE与1018在羟磷灰石粉末表面的吸附量。结果消光系数法的浓度计算值与理论值之间无明显统计学差异（P>0.05）。
BCA法中,以BSA作为标准品得到的多肽浓度计算值与理论值之间有显著统计学差异（P<0.05）;以待测多肽自身为标准品求得的多肽浓度计算值与理论值之间无明显统计学差异（P>0.05）;与待测多肽长度相同、分子量相近的多肽绘制个性化标准曲线求得的多肽浓度计算值与理论值之间存在统计学差异（P<0.05）,但求得的浓度计算值相比BSA标准曲线的浓度计算值更接近理论值（P<0.05）。不同方法的精密度之间无明显统计学差异（P>0.05）。
应用多肽自身绘制个性化标准曲线的BCA法评价BSA、CYE与1018在羟磷灰石粉末表面的吸附量,结果表明,在浓度达到75μg/mL时,CYE与1018的吸附量到达平台期,而BSA有增加趋势。
参考文献
[1]Monitoring of polypeptide content in the solid‐state fermentation process of rapeseed meal using NIRS and chemometrics[J].Zheng Xing,Xiaoshan Hou,Yingxiu Tang,Ronghai He,Benjamin K.Mintah,Mokhtar Dabbour,Haile Ma.Journal of Food Process Engineering.2018(7)
[2]Determination of polyurethane-grafted peptide（GSGREDVGSG）using bicinchoninic acid assay[J].Beata A Butruk-Raszeja,Aleksandra Ku&zacute,mi&nacute,ska.BioTechniques.2018(6)
[3]Therapeutic peptides:Historical perspectives,current development trends,and future directions[J].Jolene L.Lau,Michael K.Dunn.Bioorganic&Medicinal Chemistry.2018(10)
[4]Applicability of protein estimation methods for assaying glycomacropeptide[J].Vikrant Narwal,Neelima Sharma,Rajan Sharma,Yudhishthir S Rajput,Bimlesh Mann.International Journal of Dairy Technology.2018(2)
[5]张璐瑶.多肽浓度测定方法的比较研究与应用[D].华中科技大学,2019.