内毒素的检测方法及检测意义

2021/7/14 15:00:05

一、什么是内毒素?

细菌内毒素,又称为“热原”,细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的特有结构,细菌在存活状态时不释放出来,只有当细菌死亡自溶时才释放到细胞外,表现多种毒性作用,为区别于外毒素而称之为内毒素。细菌内毒素是由脂多糖(LPS)、蛋白质和磷脂组成的高分子量复合物,发挥毒性的成分主要为类脂质A(Lipid A),类脂A是LPS活性不可缺少的部分, 可视作LPS 的“生物活性中心”。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素的毒性作用较弱,大致相同,可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。内毒素耐热而稳定,抗原性弱。可刺激机体产生抗体,但无中和作用,形成抗毒素,经甲醛处理不能成为类毒素。

二、内毒素的检测方法有哪些?

20世纪60年代,人们发现一种古老的海洋生物,被称为“海洋活化石”的鲎,它的血液与内毒素接触后会发生特异性的凝集反应,人们经过大量研究和实验从它的血液中提取出了用于检测内毒素的“鲎试剂”。内毒素检测单位为EU/ml。

目前内毒素测定方法有:

①凝胶法,将样本与鲎试剂在试管中混合,并使用干浴器,在37±1°C下,孵育60±2min,期间不要振动。加热完成后,立即缓慢地将试管倾斜180°。如果凝胶已形成并能保持其完整性而不变形或塌陷,则结果可确定为阳性,而如果未形成凝胶则为阴性。在检测期间,对于一系列样本,要进行多倍稀释(通常为2倍),以检查每个样品的结果是否为阳性。确定为阳性的有效稀释倍数或最小浓度被称为终点。

② 脂多糖(LPS)的生物学标记的探测分析法,虽然此类方法能够检测出样品中LPS的种类并且能敏感地检测出样品中LPS的浓度,但是仍然不能准确地检测出有生物学作用的内毒素浓度。

③ 酶联免疫测定法(ELISA),ELISA法是目前新兴的内毒素检测方法, 它是基于抗原抗体的酶联免疫测定法,由外加热原质刺激巨噬细胞后产生的内热原物质如肿瘤坏死(TNF)因子白细胞介素1(IL-1)等而进行测定的。

④ 生物传感器检测法,生物传感器也是目前新兴的内毒素检测方法,大部分仍是基于鲎试验法中鲎阿米巴法溶解产物与内毒素的LPS地凝结反应。该类检测法具有测量速度快、敏感性高、最低检测限低等特点,目前,国内外有较多对生物传感器检测内毒素的研究。

三、内毒素检测的意义有哪些?

细菌内毒素具有多种生物学活性,微量的内毒素进入机体将会出现发热、血压降低、寒颤、引起DIC、内毒素败血症等一系列临床反应,因此内毒素快速定量检测,对临床对症治疗具有很深的现实意义。

①内毒素检测不仅有助于鉴别是否为细菌感染,尤其是对于革兰阴性杆菌感染具有重要的参考价值,还能提示感染严重程度,可用于发热原因的快速辅助诊断。

②有利于临床及早诊治疾病,为选择用药提供一定理论依据,对病情进行动态监测,对给药后的疗效及预后判断具有重大意义。

③用于血液透析液的监测,对于保证治疗效果和患者安全有着重要作用。

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