【背景及概述】[1][2]
红车轴草( Trifolium pratense L. )为豆科( Leguminosae)车轴草属多年生草本植物，又名红三叶草(Red Clover)、红花苜蓿和三叶草等，因植物中含有较为丰富的异黄酮，其提取物已被全球广泛应用于各种保健品或饮食增补剂中，用于预防乳腺癌、 改善骨质疏松、妇女更年期综合症等，许多国家因此将其纳入法定标准，美国药典-国家处方集的饮食增补剂分册( Botanical official monographs in USP30-NF25)就收载红车轴草植物、植物粉末、植物提取物、片剂的质量标准。在我国，红车轴草的植物资源十分丰富，南北各地均有野生分布和大面积栽培，每年对欧美市场出口大量的红车轴草提取物。
【提取方法】[1]
提取与分离红车轴草干燥药材3 kg，切段，以20倍量80%乙醇回流提取3 次，每次2 h，合并提取液，减压浓缩得稠浸膏约400 g，所得浸膏以甲醇溶解，滤液加适量硅胶拌样，进行硅胶(100～200目)柱层析，以石油醚、石油醚-乙酸乙酯、 乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，薄层色谱检识跟踪合并相同或相似洗脱流份，所得各洗脱部位再经薄层层析硅胶柱层析，并结合SephadexLH-20凝胶柱层析、薄层制备、 反相液相制备色谱等方法，分离得到13个单体化合物，其中包括8个异黄酮成分和2个黄酮成分。
【药理作用】[2] [3]
目前，已有一些研究表明红车轴草异黄酮提取物对更年期综合症有改善作用，同时还有一些红车轴草异黄酮提取物改善其他病症的报道，如骨质疏松症、 心血管疾病、癌症和经期前综合征等而这些功效均与其活性成分异黄酮有关。
已有报道指出染料木黄酮、大豆素、鹰嘴豆芽素A和刺芒柄花素具有过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator activated receptor, PPAR）α和γ双激动剂活性而它们是红车轴草异黄酮提取物的主要组成成分。PPARs是核受体超家族成员之一，参与了脂肪细胞分化、脂代谢调节等重要的生理过程，它有三种亚型（α、β、γ），其中PPARα是肝脏中脂质代谢酶类的主要转录调控因子，而PPARγ参与脂肪细胞分化和脂代谢调节，对胰岛素敏感性也具有调节作用。 PPARα的一些激动剂如贝特类化合物已用于治疗血脂异常，而PPARγ的一些激动剂如噻唑烷二酮类化合物等已用于糖尿病的临床治疗。
红车轴草异黄酮可以显著降低 db/db2型糖尿病小鼠血糖水平，但之前的研究发现红车轴草异黄酮对1型糖尿病小鼠并未显现出降血糖的作用，可能是由于1型糖尿病和2型糖尿病的发病机制不同：1型糖尿病是由于胰腺β细胞受损引起的自身的免疫反应而发病；2 型糖尿病则是体内周围组织对胰岛素的敏感性降低，而红车轴草异黄酮中的主要组分鹰嘴豆芽素A和刺芒柄花素作为胰岛素增敏剂改善了 db/db-糖尿病小鼠的胰岛素耐受性，其确切机制还有待进一步的研究。
有一些研究报道了红车轴草异黄酮提取物降甘油三酯、总胆固醇的作用。经过红车轴草异黄酮提取物的处理后，实验小鼠的甘油三酯、总胆固醇等水平都得到了一定的降低，小鼠肝组织中APOC3的mRNA表达得到了下调。
最近研究发现红车轴草异黄酮能够通过提高雌激素作用，有效抑制骨吸收，降低骨转化率，增强成骨细胞活性及骨密度，对骨质疏松具有一定的防治作用。
在研究红车轴草提物对破骨细胞数目及骨吸收过程中采用0.3 g/L、0.6 g/L和1.2 g/L 3个红车轴草提取物质量浓度，比较不同剂量红车轴草对破骨细胞影响，发现随着红车轴草剂量的增加对破骨细胞的抑制作用增加，因此破骨细胞相关分化蛋白研究采用1.2 g/L红车轴草剂量进行研究。破骨细胞给予红车轴草提取物连续培养14 d，测定破骨细胞分化相关蛋白NFATc-1和c-fos结果发现，给予红车轴草提取物能够明显降低NFATc-1和c-fos蛋白的表达，说明红车轴草提取物可能通过降低NFATc-1和c-fos蛋白的表达，进而抑制破骨细胞分化。
【主要参考资料】
[1]张念,华茉莉,姜仁吉,孔德云.红车轴草醇提物的化学成分研究[J].中成药,2010,32(10):1746-1749.
[2]洪雅敏,钟佛金,陈丽妹,叶红,邱龙新.红车轴草提取物对db/db小鼠糖脂代谢的影响[J].龙岩学院学报,2012,30(05):40-44.
[3]李扬,王德平,艾东,魏鑫,关利新,关悦.红车轴草提取物对破骨细胞骨吸收及分化的作用机制[J].中国组织工程研究,2017,21(20):3129-3134.