背景[1-3]
鸡血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA KIT采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测样本中鸡血管内皮细胞生长因子(VEGF)含量。
实验原理：往预先包被人鸡血管内皮细胞生长因子(VEGF)（BMI-1）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人鸡血管内皮细胞生长因子(VEGF)（BMI-1）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
鸡血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA KIT
操作步骤：
1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
应用[4][5]
用于龙葵与血管内皮细胞生长因子（VEGF）抗体对人大肠癌血管生成的影响研究
比较抑制正常发育血管，龙葵组龙葵量在15mg时对血管新生的抑制作用不明显,而当龙葵量达25mg时，鸡胚的发育受到明显抑制或死亡，8只鸡胚样本中出现5只鸡胚死亡。当龙葵给药量为20mg时，给药48h后可见成形的胚胎活动，CAM上的给药载体旁边出现一个缺少血管的区域。龙葵总提取物对U266（多发性骨髓瘤细胞）G0-Gl期细胞数减少，S、G2-M期细胞数增加。
龙葵醇提物可明显延长荷瘤肝癌小鼠生存时间,抑制肉瘤的生长。龙葵具有清热解毒、活血消肿、利水通淋的功效，临床上用龙葵水煎剂或注射剂治疗宫颈癌、食道癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、绒毛膜上皮癌、卵巢癌、肉瘤等多种恶性肿瘤，均取得了一定的疗效。
龙葵可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生。实验表明低能量激光照射联合龙葵多糖可以抑制肿瘤细胞中VEGF的生成，导致血管生成的环节受到抑制,肿瘤组织血管生成减少，阻断肿瘤生长所需营养,抑制肿瘤细胞生长、侵袭、转移。
方法：以9日龄的鸡胚为模型，移植人结肠癌HT-29细胞于鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）上，孵箱培养1日后分别加入龙葵碱溶液（实验组1）、VEGF抗体（实验组2）及无菌PBS溶液（对照组），继续培养5日，观察移植瘤鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成情况，测量其微血管密度、微血管面积。莱卡立体显微镜拍照存档，用Imageproplus6.0软件分别分析实验组、对照组鸡胚绒毛尿囊膜微血管面积；将石蜡包埋的鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤病理切片，采用SP两步法作免疫组化，检查肿瘤组织的CD34抗原标记的微血管密度；SPASS17.0软件分析计算各组间微血管面积。
参考文献
[1]Aqueous extract of Solanum nigrum inhibit growth of cervical carcinoma（U14）via modulating immune response of tumor bearing mice and inducing apoptosis of tumor cells[J].Jian Li,Qingwang Li,Tao Feng,Kun Li.Fitoterapia.2008(7)
[2]Vasculogenesis[J].W Risau,I Flamme.Annual Review of Cell and Developmental Biology.1995
[3]Solanum nigrum L.Extract Inhibits 2-Acetylaminofluorene-Induced Hepatocarcinogenesis through Overexpression of Glutathione S-Transferase and Antioxidant Enzymes.Jeng-Dong Hsu,Shao-Hsuan Kao,Chang-Che Tu,Yi-Ju Li,Chau-Jong Wang.Journal of Agriculture.2009
[4]Solanum nigrum Linn.Water Extract Inhibits Metastasis in Mouse Melanoma Cells in Vitro and in Vivo.Hsueh-Chun Wang,Dun-Hao Wu,Yun-Ching Chang.Journal of Agriculture.2010
[5]贺新媛.龙葵与血管内皮细胞生长因子（VEGF）抗体对人大肠癌血管生成的影响[D].遵义医学院,2014.