背景[1][2]
TNFAIP3 定位于染色体6q23。其cDNA 序列长度为4 440 bp，开放读码框为2 370 bp，编码790氨基酸的90 kD 蛋白-A20。A20 蛋白在羧基末端含有锌指(Zinc finger，ZnF) 基序，在氨基端具有卵巢肿瘤(Ovarian tumor，OTU) 基序，这一结构特点使其具有去泛素化和泛素化双重酶功能。
目前，TNFAIP3在临床和生物学方面的重要作用越来越受到人们的重视，主要有以下三方面的原因：①人类基因组学研究证实TNFAIP3 单核苷酸多态性与炎症、自身免疫密切相关。②基因靶向小鼠的研究显示A20能调控多种免疫细胞的功能，减少实验性自身免疫病的发生。③生物化学的研究揭示了A20 调控泛素依赖的转录因子NF-κB 以及细胞生存信号通路的复杂机制。
TNFAIP3 是一个重要的负性免疫调节基因，表达于胸腺、脾脏等多个免疫器官。TNFAIP3 基因敲除的小鼠由于炎症和多器官的组织损伤，在出生后迅速死亡。在免疫细胞中，过表达的TNFAIP3 能够阻断由TNF 受体、Toll 样受体、NOD 样受体(NOD-like receptors，NLRs)或T 细胞受体(TCR) 引起的NF-κB 信号转导通路的激活。单克隆抗体技术起源于Kohler等创建的体外鼠源杂交瘤技术。
经多年研究，鼠单抗已从单纯的生物实验室科研及临床诊断发展到治疗性抗体药物。但鼠单抗的主要缺陷是小鼠免疫系统不能识别某些免疫原，尤其是鼠源性的免疫原，而且鼠单抗的亲和性不如兔来源抗体的亲和性高。然而由于没有发现兔源性的浆细胞瘤及病毒体外转染兔B细胞的技术困难，直到1995年在c-myc/v-abl转基因兔身上成功地获得了兔浆细胞瘤细胞系，得到了稳定的兔-兔杂交瘤，才使兔单克隆抗体技术有了突破性进展。
近年兔单克隆抗体技术日臻完善，目前商品化的兔单抗已达数千种。TNFAIP3兔单克隆抗体对应于人TNFAIP3中残基的合成肽。TNFAIP3兔单克隆抗体可用于荧光激活细胞分选、免疫细胞化学/免疫荧光、免疫组化—PFA固定细胞、免疫印迹等。不同应用浓度不同，如用于WB时稀释度为1：1000 -10000，用于免疫细胞化学时稀释度为1：100，用于荧光激活细胞分选时稀释度为1：50，特定应用的工作稀释度应由研究者确定。
应用[1]
1. 在生物标记物开发中的应用
兔单克隆抗体包括TNFAIP3兔单克隆抗体广泛用于生命科学研究的各个领域，尤其在免疫组织化学以及检测蛋白的转译后修饰方面具有独特优势。至今已有100多种兔单克隆抗体开发用于癌症的IHC临床诊断与研究，其中最具代表性的就是Her2和c-Kit的IHC诊断试剂盒。在蛋白修饰研究领域，如蛋白的磷酸化，在与疾病相关的蛋白质信号通路中起到了至关重要的作用，使用磷酸化蛋白的兔单克隆抗体可以非常清楚地显示蛋白的磷酸化程度。目前已有200多种磷酸化特异性的兔单克隆抗体面世。
2. 在治疗抗体药物开发中的应用
临床使用的大多数治疗用抗体均需经体外亲和力成熟这一步骤，以提高抗体的亲和力。这一过程常需8至12个月，最终亲和力在纳摩尔级(10-9 mol/L)。兔单抗不需使用体外亲和力成熟，就能达到10-11至10-13 mol/L。这种高亲和力不仅减少抗体的临床使用量，还能减少由于使用大量抗体带来的副作用。但这种高亲和力的优势还需在动物和临床试验中进一步证实。
另外，与鼠单抗的人源化相比，兔单克隆抗体的人源化更容易。因为，兔单克隆抗体主要由一种重链及轻链基因构成，通过分析大量的兔单克隆抗体序列发现，兔与人的抗体同源性更高，约60%～76%，而小鼠与人的抗体同源性略低，为57%～72%，说明用兔单克隆抗体开发药物前景更广阔。
主要参考资料
[1] 李婷婷, 崔慧斐. 兔单克隆抗体的发展及应用前景[J]. 食品与药品, 2012, 14(9): 373-376.
[2] 李娜, 王健健, 张帅, 等. TNFAIP3 基因多态性与自身免疫性疾病相关性的研究进展[J]. 中国免疫学杂志, 2014, 30(9): 1278-1281.