背景[1-3]
欧前胡素属于6.7-峡喃香豆素类，广泛分布于植物界，尤其伞形科常用中药如白芷、独活、前胡、羌活、北沙参等含且丰富，而且是其主要药理效应成分。
欧前胡素是属于香豆素类-特别是呋喃香豆素类的植物次生代谢产物。欧前胡素通过α1β2γ2S受体增强GABA诱导的氯离子电流（IGABA）。欧前胡素可使IGABA在100μmol下增加50.5±16.3％，在300μmol下增加109.8±37.7％。在白藜芦醇根中发现的欧前胡素和Phellopterin在体外抑制地西泮与大鼠脑GABAA受体的苯二氮卓位点的结合，欧前胡素的IC50为12.3μmol，Phellopterin的IC50为400nmol。
欧前胡素浓度范围为3.5至14毫摩尔，通过与GABA-T的活性位点不可逆地结合，以时间依赖性和浓度依赖性方式显着且不可逆地抑制GABA-T。角质素是一种可逆的乙酰胆碱酯酶（AChE）抑制剂，并以剂量依赖的方式起作用。通过分光光度法在12.5,25,50和100μg/mL的浓度下测试欧前胡素和来自当归果实的粗提取物的AChE和BChE抑制活性。欧前胡素对AChE的抑制率低（13.75-46.11％），而对BChE的抑制作用显着（37.46-83.98％）。欧前胡素对BChE而不是AChE具有选择性，BChE的IC50为31.4μmol。欧前胡素与（+）-Byakangelicol一起被发现是最有效的BACE-1抑制剂，IC50分别为91.8和104.9μmol。
应用[4][5]
用于欧前胡素影响HNF-4α调控肝纤维化进程的研究
采用硫代乙酰胺（Thioacetamide,TAA）诱导小鼠肝纤维化,探究欧前胡素影响HNF-4α对肝纤维化进程的研究,为欧前胡素成为潜在的肝纤维化治疗药物提供一定的理论依据。
方法:（1）体内实验选用C57BL/6小鼠,随机分为六组:正常组、模型组、IM低剂量给药组（20 mg/kg）、IM高剂量给药组（50 mg/kg）,姜黄素阳性对照组（20 mg/kg）,IM单独给药组（50 mg/kg）。腹腔注射TAA（100 mg/kg或200mg/kg）5周建立肝纤维化模型。收集血清检测小鼠肝脏转氨酶水平;通过H&E染色、天狼猩红染色观察肝脏组织病理学改变;利用western blot、RT-PCR检测肝纤维化指标（α-SMA、Collagen-I、TIMP-1、MMP-13）、炎症细胞因子（F4/80、MPO、caspase-1、IL1R1、IL-1β）;利用western blot、RT-PCR、免疫荧光和免疫组织化学法检测HNF-4α在总蛋白、浆蛋白和核蛋白中的调控作用。
（2）体外实验选用大鼠肝星状细胞（Hepatic stellate cells,HSCs）用TGF-β（10 ng/m L）激活1 h,不同浓度的IM（3.125、6.25、12.5μM）给药孵育6 h,利用western blot和RT-PCR方法检测HNF-4α、肝纤维化指标和炎症细胞因子的蛋白和m RNA表达水平;以及HNF-4α在核蛋白和浆蛋白中不同的表达情况。
（3）对人肝星状细胞（LX-2）进行si HNF-4α实验,在HNF-4α表达降低的条件下,检测肝纤维化指标（α-SMA、Collagen-I、TIMP-1、MMP-13）以及炎症细胞因子（caspase-1、IL1R1、IL-1β）的表达变化。结果:在TAA诱导的小鼠肝纤维化实验中,血清中ALT、AST水平升高,IM给药后能够降低ALT、AST的水平。H&E染色表明IM减轻了小鼠肝脏组织的病理损伤。
天狼猩红染色表明IM给药后小鼠胶原沉积情况得到改善。Western blot和RT-PCR结果显示,IM显著抑制了肝纤维化指标α-SMA、Collagen-I、TIMP-1、MMP-13的表达水平,降低MPO、F4/80、IL1R1、caspase-1、IL-1β等炎症细胞因子的释放,减轻肝脏炎症。此外IM可以上调HNF-4α在总蛋白和浆蛋白中的表达,抑制其在核中的表达,并通过HNF-4α的激活改善肝纤维化。
在细胞实验中,IM可以降低活化的HSCs中α-SMA、Collagen-I、TIMP-1的蛋白和m RNA水平,下调TIMP-1/MMP-13的比率,抑制IL1R1、caspase-1、IL-1β等炎症细胞因子的释放。并且IM可以通过上调细胞总蛋白和浆蛋白中HNF-4α的表达水平抑制肝星状细胞的活化。沉默HNF-4α的si RNA后,HNF-4α表达降低,IM给药后HNF-4α被激活,活化HNF-4α后进而抑制了α-SMA、Collagen-I、caspase-1、IL-1β等的表达,但是IM在HNF-4α抑制条件下对炎症细胞因子及肝纤维化标志物的抑制作用减弱。
结论:欧前胡素通过上调HNF-4α的表达减少ECM沉积,抑制肝星状细胞活化;欧前胡素抑制F4/80、IL1R1、caspase-1等炎症细胞因子的释放,减轻肝脏炎症反应。欧前胡素通过激活肝脏中HNF-4α的表达,减少肝脏胶原沉积和炎症细胞因子的分泌,改善了TAA诱导的肝纤维化。
参考文献
[1]Imperatorin:A review of its pharmacology,toxicity and pharmacokinetics[J].Mao Deng,Long Xie,Li Zhong,Yanmei Liao,Luona Liu,Xiaofang Li.European Journal of Pharmacology.2020(prep)
[2]The Protective Effects of Imperatorin on Acetaminophen Overdose-Induced Acute Liver Injury.[J].Gao Zhao,Zhang Jiecheng,Wei Li,Yang Xingping,Zhang Yuan,Cheng Bo,Yang Zehong,Gao Weihang,Song Chunhui,Miao Wei,Williams Kevin,Liu Changhui,Xu Qin,Chang Yongsheng,Gao Yong.Oxidative medicine and cellular longevity.2020
[3]HNF-4αinhibits hepatocellular carcinoma cell proliferation through mir-122-adam17 pathway.[J].Yang Guang,Zhang Min,Zhao Yawei,Pan Yue,Kan Mujie,Li Jing,He Kan,Zhang Xuewen.PloS one.2020(3)
[4]HNF?4αdownregulation promotes tumor migration and invasion by regulating E?cadherin in renal cell carcinoma.[J].Gao Yaohui,Yan Yang,Guo Jing,Zhang Qian,Bi Dexi,Wang Fen,Chang Zhengyan,Lu Ling,Yao Xudong,Wei Qing.Oncology reports.2019(3)
[5]高璐.欧前胡素影响HNF-4α调控肝纤维化进程的研究[D].延边大学,2021.