逆转录酶（全称：依赖于RNA的DNA聚合酶）是一类存在于部分RNA病毒中具有逆转录活性、能以单链RNA为模板合成DNA的酶。由逆转录酶催化逆转录合成的DNA称为互补DNA（cDNA）。
通常情况下，细胞内的转录是以DNA为模板合成RNA的，所得RNA为信使RNA（mRNA）供蛋白质合成作模板用。而在部分RNA病毒中，要实现自身的扩增，必须具有DNA，因此先由RNA逆转录合成cDNA再由cDNA转录出RNA。
用途
逆转录酶可用于逆转录聚合酶链式反应，将RNA转变为DNA后扩增，以获得某生物体表现RNA的序列。
这些活化因子会将反转录病毒里的单股RNA转化成双股cDNA并且将之插入宿主细胞的基因里，在一段时间内繁殖。相同的反应被广泛的应用在实验室中将RNA转换成DNA如分子克隆，RNA测序，聚合酶链反应（PCR），或是DNA微阵列。 良好的反转录酶研究物质包含:
人类免疫缺陷病毒1型的反转录（PDB 1HMV）
莫洛尼鼠白血病病毒（英语：murine leukemia virus）的反转录酶
禽成髓细胞瘤病毒的反转录酶
维持真核细胞的染色体端粒存在的端粒酶反转录酶（英语：Telomerase reverse transcriptase）。
反转录的过程
反转录酶从RNA模板中制造出单股DNA。在缺乏DNA-dependent DNA聚合酶的病毒中，双股DNA的制造可以经由宿主编码DNA聚合酶δ完成，过程中可能会将病毒的DNA-RNA引子误认并且借由和引子去除类似的机制合成出双股DNA，而在新的合成的DNA即取代了旧有的RNA模板。反转录的过程的错误率很高，因此在整个步骤中突变有很大的机会会发生。这种突变的现象可能会形成病毒的抗药性。
DNA聚合酶活性
逆转录酶是由不同生化活性的不同结构酶组成。尽管不同生物体来源的逆转录酶功能存在或多或少的差异，包括如DNA依赖性DNA聚合酶活性,但逆转录酶的主要功能仍取决于RNA依赖性DNA聚合酶和RNase H酶活性。逆转录过程通常涉及许多步骤：
在存在退火引物的条件下，逆转录酶结合到RNA模板并引发反应。
RNA依赖性DNA聚合酶活性通过掺入dNTPs合成互补DNA链。
RNase H活性降解DNA:RNA复合物中的RNA模板。
DNA依赖性DNA聚合酶活性（如果存在)识别单链cDNA作为模板，使用RNA片段作为引物，合成第二链cDNA。形成双链cDNA。