背景及概述[1][2]
连翘酯苷A对金黄色葡萄球菌等 11种致病菌均有极强的抑制作用，并具有抗病毒、抗炎、解热、抗氧化等作用，是迄今为止从连翘中发现的药理活性最强的活性成分之一。连翘为木犀科植物连翘的干燥果实，按采收期的不同可分为青翘和老翘。具有清热解毒、消肿散结的功效，主治痈疽、瘰疬、乳痈、丹毒、风热感冒、高热烦渴、热淋尿闭等症。连翘主要含苯乙醇苷类、木脂素及其苷类、五环三萜类、挥发油类等化合物。
现代药理研究证明具有抗菌、抗炎、解热等作用。同一产地不同批次的连翘药材中连翘酯苷 A含量差异较大。将药材的外观、形态等因素与含量进行对比分析，发现是药材的成熟度和采收时间对连翘酯苷 A含量有较大影响。当连翘酯苷A含量较高时，药材颜色一般较深，为成熟度较低即采收时间较早的药材，而药材颜色越浅即成熟度越高(俗称老翘) 时，连翘酯苷A含量则越低，因此选择连翘药材时，应注意成熟度和采收时间对于连翘药材质量的影响。
制备[3]
CN201410149031.3提供一种产连翘脂苷A、B和连翘苷的连翘内生真菌，所述的连翘内生真菌为枝状枝孢 (Cladosporium cladosporioides)，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年1月15日，保藏编号： CGMCC No.8728。
CN201410149031.3提供一种产连翘脂苷A、B和连翘苷的连翘内生真菌的应用，具体的，连翘内生真菌在生产药物活性成分(连翘脂苷A、B和连翘苷)中的应用，包括以下步骤：取连翘内生真菌(CGMCC No.8728)发酵培养液，分离药物活性成分即可。更具体的，连翘内生真菌在制备药物中的应用，包括以下步骤：取连翘内生真菌(CGMCC No.8728)发酵培养液，分离药物活性成分，与辅料混合即可。所述的药物活性成分为连翘脂苷A、连翘脂苷B和连翘苷，经分离、纯化后，可以按照常规方法制备成片剂、颗粒剂、粉剂、注射液、口服液、脂质体等剂型。所述的辅料为医药、农药领域常规辅料。当制备成注射液时，辅料可采用甘露醇、葡萄糖、山梨醇等，片剂时采用淀粉、羧甲基淀粉钠、微晶纤维素等；口服液时采用油性基质如脂肪酸、脂肪酸甘油酯等。所述发酵培养液的制备方法为：取经活化的连翘内生真菌置于PDB培养基中，在27 ～29℃下震荡培养4～7天即可。
本发明的有益效果：本发明中连翘内生真菌为枝孢菌黑霉菌(Cladosporium cladosporioides)，从河南省洛阳市周山风景区的连翘活体中分离得到，属于一种共生微生物，可以代谢产生与连 翘成分相同的成分，具有很强的杀灭和抑制细菌的作用，发酵培养后能够产生对致病性大肠杆菌(E.coli K99，ATCC hb-8178))、沙门氏菌(Salmonella.Typhimurium，ATCC14028)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus.aureus，ATCC29213)等有抑制作用的活性代谢产物，包括连翘脂苷A、B和连翘苷等，是医药行业重要的微生物资源。
药理研究[2]
P-gp是一种相对分子质量170 kDa 的跨膜糖蛋白，主要分布于细胞膜上， 是 ABC-B1 基因( MDRl)编码产物。早期 P-gp 转运机制及其抑制剂的研究较多，现已拓展为研究新药筛选、新药评价和药物相互作用( drug-drug interaction， DDI) 等方面，Zhang等研究附子-甘草药对时发现，有P-gp 抑制剂存在时，主要有效成分在体内浓度显著增高。提示基于药物对P-gp 的作用是研究中药联用规律的发展趋势。Rh- 123是经典的 P-gp 功能探针药物，可用于快速检测药物是否为 P-gp 的底物或抑制剂。孟祥乐等人以Rh-123 为探针底物，检测连翘酯苷对 P-gp 的外排作用，结果发现不同质量浓度连翘脂苷 A 均可抑制 P-gp对Rh- 123 的外排，对P-gp 有一定抑制作用，且与浓度呈正相关。证实连翘脂苷 A 是 P-gp 的抑制剂。这可能是连翘脂苷 A 增加金银花中咖啡酰类成分吸收的主要原因。P-gp 作为一种能量依赖性药物外排泵，P-gp 外排的机制为P-gp底物可通过和其中的氨基酸位点结合，激活 P-gp ATP 酶，释放出 ATP 分子，导致药物结合口袋周围 TM 域(如 TM1 和 TM2) 的重排，引起药物的外排。P-gp 抑制剂主要通过抑制P-gpATP 酶，降低 P-gp 对药物外排，增加药物的吸收。通过观察连翘脂苷A对 P-gp ATP 酶活性发现，不同质量浓度连翘脂苷 A对 P-gp ATP 酶活性均有抑制作用，但抑制作用与浓度呈反比，质量浓度越低，抑制P-gp ATP酶的作用越强。通过研究连翘脂苷 A 对 P-gp 外排功能发现，连翘脂苷 A 主要是通过抑制 P-gp ATP 酶活性，对 P-gp的外排有抑制作用，从而减少对咖啡酰类药物的外排，增加后者在体内吸收。该结果从分子学角度提示金银花-连翘药对联用增效的机制与 P-gp 蛋白外排功能有关，且二者在量的配比上非常重要。
主要参考资料
[1]姜艳艳,石任兵,刘斌,刘洋,梁兆昌,王帅.RP-HPLC法测定连翘中连翘脂苷A的含量[J].北京中医药大学学报,2009,32(08):565-567+570.
[2]孟祥乐,郭艳丽,苏成福,黄海英,桂新景,李学林.连翘脂苷A抑制Caco-2细胞膜上P-糖蛋白的外排功能及作用机制探讨[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(17):5-8.
[3] CN201410149031.3 一种产连翘脂苷A、B和连翘苷的连翘内生真菌及其应用