背景[1][2][3][4]
NF-κB p65 Rabbit Polyclonal Antibody（NF-κB p65兔多克隆抗体）是将NF-κB p65蛋白对兔进行系统免疫后从兔血中制备的多克隆抗体。NF-κB p65（RELA）参与NF-κB异二聚体形成，核转位和活化的REL相关蛋白。NF-κB是参与所有类型细胞过程的必需转录因子复合物，包括细胞代谢，趋化性等.RELA的磷酸化和乙酰化是NF-κB活化所需的关键翻译后修饰。
RELA也被证明可以调节免疫反应，RELA的激活与多种类型的癌症正相关。RELA是NF-κB家族的一员，是强化研究中最重要的转录因子之一。由5个基因编码的7种蛋白质参与NF-κB复合物，即p105，p100，p50，p52，RELA，c-REL和RELB。[9]如在此复杂的其他蛋白质，RELA包含N-末端REL-同源结构域（RHD），并且还C-端反式激活域（TAD）。
RHD参与DNA结合，二聚化和NF-κB/REL抑制剂相互作用。另一方面，TAD负责与基础转录复合物相互作用，包括许多转录共激活因子，如TBP，TFIIB和CREB-CBP。RELA和p50是NF-κB同源二聚体和异二聚体中最常见的异二聚体复合物，是参与核转位和NF-κB活化的功能成分。作为NF-κB的原型异二聚体复合成员，与p50一起，RELA/p65在经典NF-κB活化和核转位过程中与细胞质和细胞核中的各种蛋白质相互作用。
在无活性状态下，RELA/p50复合物主要被胞质溶胶中的IκBα隔离。TNFα，LPS和其他因子充当激活诱导物，然后在IκBα的残基32和36处磷酸化，导致IκBα通过遍在蛋白-蛋白酶体系统快速降解并随后释放RELA/p50复合物。用于被IκBα隔离的RELA核定位信号现在暴露，并且发生NF-κB的快速易位。同时，存在非经典的NF-κB活化途径，其涉及将p100蛋白水解切割成p52而不是p50。
此过程不需要RELA，因此这里不再详细讨论。由于TNFα刺激导致NF-κB核定位后，p50/RELA异二聚体将作为转录因子发挥作用，并与各种生物过程中涉及的各种基因结合，如白细胞活化/趋化性，TNFIKK的负调控。途径，细胞代谢，抗原加工，仅举几例。RELA在不同残基处的磷酸化也使其能够与CDK和P-TEFb相互作用。
RELA中丝氨酸276的磷酸化允许其与含有CDK9和细胞周期蛋白T1亚基的P-TEFb相互作用，并且磷酸化ser276 RELA-P-TEFb复合物是IL-8和Gro-β活化所必需的。另一种机制涉及以RELA丝氨酸276磷酸化非依赖性方式激活预装有Pol II的基因。通过小鼠中的同源重组基因敲除NF-κB基因显示了这些组分在先天和适应性免疫应答中的作用。由于肝细胞凋亡，RELA敲除小鼠是胚胎致死的。
也观察到淋巴细胞激活失败，表明RELA在免疫系统的正常发育中是必不可少的。相比之下，其他REL相关基因的缺失不会导致胚胎发育失败，但也会注意到不同程度的缺陷。细胞因子如TNFα和IL-1可刺激RELA活化的事实也支持其参与免疫应答。通常，RELA通过NF-κB活化参与适应性免疫和对入侵病原体的反应。没有单独的NF-κB蛋白的小鼠缺乏B细胞和T细胞活化和增殖，细胞因子产生和同种型转换。RELA的突变也被发现是炎症性肠病的原因。
研究应用[5]
NF-κB p65 Rabbit Polyclonal Antibody可用于研究急性心肌梗死模型大鼠TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路。研究方法取雄性SD大鼠48只,随机分成6组:正常组,模型组,复方丹参滴丸组(0.0729 g·kg-1),复方龙脉宁低、中、高剂量组(2.16,4.32,8.64 g·kg-1)。采用背部皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素的方法建立急性心肌梗死动物模型。
采用苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠心肌组织病理学变化;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠血清中白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-6（IL-6）,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）,一氧化氮（NO）的含量;免疫组化法测定大鼠心肌组织中NF-κB激酶β抑制蛋白（IKKβ）,NF-κB抑制蛋白（IκBα）的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠心肌组织中TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白的表达。
结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌损伤明显,血清中IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1,NO含量显著升高（P<0.05）,心肌组织中IκBα蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,心肌组织中IKKβ,TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,复方龙脉宁低、中、高剂量组能明显改善大鼠心肌损伤,明显升高IκBα蛋白的表达（P<0.05）,明显降低血清中IL-1β,IL-6,TNF-α,MCP-1,NO的活性及心肌组织中IKKβ,TLR4,MyD88,NF-κB p65蛋白的表达（P<0.05）。
结论:复方龙脉宁对心肌梗死的保护作用,可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路相关因子的表达有关。
参考文献
[1] Nolan GP, Ghosh S, Liou HC, Tempst P, Baltimore D (Mar 1991). "DNA binding and I kappa B inhibition of the cloned p65 subunit of NF-kappa B, a rel-related polypeptide". Cell. 64 (5): 961–9. doi:10.1016/0092-8674(91)90320-X. PMID 2001591.
[2] "RELA v-rel avian reticuloendotheliosis viral oncogene homolog A [Homo sapiens (human)]". Gene. National Center for Biotechnology Information (NCBI), U.S. National Library of Medicine.
[3] "Homo sapiens p65 gene for p65 subunit of transcription factor NF-kappa". Nucleotide. National Center for Biotechnology Information (NCBI), U.S. National Library of Medicine. 2006-11-14
[4] Li Q, Verma IM (Oct 2002). "NF-kappaB regulation in the immune system". Nature Reviews. Immunology. 2 (10): 725–34. doi:10.1038/nri910. PMID 12360211
[5] 复方龙脉宁对急性心肌梗死模型大鼠TLR4/MyD88/NF-κB p65信号通路的影响[J]. 卜雕雕,苏卓,柏希慧,高佳雨,邹俊波,张丹,王昌利.中国实验方剂学杂志 .